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第一部分SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及其生物学特性鉴定目的:SD大鼠BMSCs的体外分离、培养和纯化,以及生物学特性鉴定,为整个课题打下基础。方法:联合采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法,分离培养和纯化BMSCs,同时显微镜下观察细胞生长状况。流式细胞仪鉴定细胞表面标记物,鉴定其向成骨、成脂分化潜能。结果:分离培养的BMSCs呈梭形、大小均一,类似成纤维细胞样。流式结果显示BMSCs表面CD44、CD90阳性表达,而CD45阴性表达。P3代BMSCs可向成骨、成脂诱导分化。结论:本部分实验成功分离培养了BMSCs,纯度高、形态均一,可用于之后的相关实验研究。第二部分VEGF刺激骨髓间充质干细胞后CXCR4表达的实验研究目的:探讨BMSCs经VEGF刺激后对其归巢的影响方法:将第一部分分离培养的BMSCs随机分成3组,A组:空白对照组,完全培养基培养;B组:在BMSCs的完全培养液中加入VEGF,使最终VEGF浓度为10ng/ml。C组:在BMCs的完全培养液中加入VEGF,使最终VEGF浓度为50ng/ml。流式细胞分别测量刺激48h后各组胞膜和胞膜内CXCR4的表达。结果:各组BMSCs胞膜和胞膜内均有CXCR4表达,且胞膜内高于胞膜的表达,其中C组表达均最高,P<0.05结论:1、BMSCs和经VEGF刺激的BMSCs胞膜和胞膜内均有CXCR4表达;2、VEGF刺激BMSCs后,胞膜和胞膜内CXCR4表达增高;且50ng/ml浓度下表达最高;第三部分SDF-1在放射性损伤的肠组织中的表达目的:1、建立急性放射性肠损伤的模型;2、进一步探讨VEGF对BMSCs的归巢影响。方法:90只雌性的SD大鼠随机分成3组(每组30只),即对照组(A组)、BMSCs治疗组(B组)和经VEGF刺激的BMSCs的治疗组(C组)。B组和C组在照射后4小时内通过尾静脉注射1×106/ml的雄性大鼠BMSCs悬液1ml及经50ng/ml的VEGF刺激48小时后的BMSCs悬液1ml;A组于照射后4小时内尾静脉输注生理盐水1ml。造模后第1、3、7、14、21天每组随机处死6只大鼠,留取全血与两份末端回肠标本。显微镜下观察肠道组织结构,测量绒毛高度及隐窝深度;ELISA法测量血清中瓜氨酸和VEGF的浓度。免疫组化SP法检测造模后3天肠组织SDF-1的表达。结果:1、成功建立了放射性肠损伤模型;造模后第3、7、14天,C组大鼠精神状态,运动量,饮食量,排泄状况均优于A组、B组,而造模后第1、21天三组大鼠之间无明显差异。HE染色结果显示,造模后第3、7、14天,C组肠道结构较A、B组完整,肠粘膜上皮细胞坏死少,伴有的炎性细胞较少,而腺体结构却较丰富。通过测量肠道绒毛高度和隐窝深度评估肠道功能,造模后第3、7、14天,同一时期绒毛高度和隐窝深度,C>B>A,P<0.05有统计学差异。造模后第1、21天,同一时期绒毛高度和隐窝深度,各组无统计学差异,P>0.05.2、免疫组化SP法测量各组受损肠组织SDF-1的表达量,发现C组SDF-1的表达量明显高于A、B组,且B组表达量高于A组。结论:1、直线加速器建立放射性肠损伤模型的剂量为12Gy;2、放射性肠损伤可以自我修复,周期在2~3周左右;3、经VEGF刺激的BMSCs能够促进急性放射性肠损伤的修复,能提高其修复的效率,但从远期效果来看无明显差异;4、经VEGF刺激的BMSCs能通过提高BMSCs的归巢率促进损伤肠道修复,机制与SDF-1/CXCR4轴有关。