田七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠的CTGF/TGF-β1/Smads信号通路的影响

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目的:观察田七注射液对阿霉素(Adriamycin,ADR)肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smads蛋白表达的影响,探讨田七注射液对ADR大鼠肾脏纤维化的作用机制。  方法:将清洁级(Sprasue-Dawley)SD雄性大鼠60只,随机分为三组:对照组,模型组,田七注射液治疗组(以下简称田七组),每组20只。三组均行右肾切除术,对照组术后不注射ADR,予生理盐水(10ml/kg〃d)腹腔注射;模型组于术后第7天及术后第30天分别尾静脉注射ADR5mg/kg、3mg/kg建立阿霉素肾纤维化大鼠模型,造模后予生理盐水(10ml/kg〃d)腹腔注射;田七组按上法造模后,予田七注射液(2g/kg〃d)腹腔注射给药,连续给药8周后,与其他两组同时处死。处死前收集腹主动脉血和肾脏组织标本。观察各组大鼠治疗前后的体重及一般状况;在给予田七注射液的第2、第4、第6和第8周后分别于各组设臵代谢笼,留取24小时尿液。采用磺柳酸-硫酸钠比浊法检测24小时尿蛋白定量;采用全自动化仪检测血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)含量;将肾组织病理切片进行HE、六胺银染色、Masson染色,光镜下观察肾脏病理改变;采用免疫组化法检测肾组织中CTGF、TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达水平。  结果:①一般情况:与对照组大鼠相比,模型组大鼠活力明显减退、体重下降、眼球颜色由淡红转为暗红,舌质绛紫、尾部有瘀斑,差异具有统计学意义(P<0.05)。田七组大鼠活动度、灵敏度略优于模型组,眼球颜色转为淡红,舌质瘀紫、尾部瘀斑程度均有所改善,且体重下降速度较模型组慢。②24h尿蛋白定量结果:模型组及田七组肾纤维化大鼠24h尿蛋白定量较对照组均明显升高(P<0.01);与模型组比较,田七组24h尿蛋白定量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。③生化检测结果:田七组和模型组大鼠的BUN、Scr均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,田七组 BUN、Scr有所降低(P<0.05)。④肾脏病理切片显示:与对照组相比,模型组的肾脏肿大,颜色变浅,有囊性感。肾脏剖面,模型组的肾脏实质明显变薄,呈囊状,颜色暗红,表面粗糙不平,有囊肿和瘢痕。缺血状,以肾皮质为重,光镜下肾小管上皮细胞扁平,细胞崩解、脱落,伴细胞再生;肾小管基膜增厚,管腔扩张,内可见细胞的崩解碎屑;肾间质可见淋巴-单核细胞浸润,伴细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)沉积;部分肾小球有新月体形成,部分肾小球出现局灶硬化;而田七组的肾脏病理改变明显轻于模型组;与模型组比较,田七组肾小球硬化指数及肾间质损伤分数明显下降(P<0.01)。⑤各组大鼠免疫组化法检测结果:与对照组比较,模型组CTGF、TGF-β1、Smad3表达显著上调(P<0.01),Smad7表达显著下调(P<0.01);与模型组比较,田七注射液治疗组肾组织 CTGF、TGF-β1、Smad3表达显著下调(P<0.01),Smad7表达显著上调(P<0.01)。  结论:①田七注射液可显著改善肾纤维化大鼠的一般情况、肾功能及肾脏病理,减少尿蛋白,提示田七注射液具有肾保护作用。②田七注射液肾保护作用机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路活化,继而下调CTGF蛋白表达有关。
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