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本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法对几种圆网蛛总科蜘蛛的酯酶同工酶进行了较为详尽的研究分析,旨在为蜘蛛的遗传多样性、地理变异以及种属鉴定等方面的研究提供基本依据。研究内容主要包括三个部分: (1)从简单磷酸提取缓冲液和 Tris-HCl提取缓冲液中选取合适的研磨提取缓冲液;通过试验后的酶谱比较分析得出:用相对较简单易行的 Tris-HCl 提取缓冲液来研磨蜘蛛,用于酯酶同工酶的分析效果较好。 (2)对角类肥蛛的头胸部和腹部的酯酶进行了比较分析;结果表明:角类肥蛛中的酯酶为单体酶,头胸部和腹部的酯酶酶谱差异显著。腹部的酯酶呈现出 4 个位点:Est-1,Est-2,Est-3,Est-4。Est-1 和 Est-4位点为纯合基因型,在Est-2和Est-3位点为杂合基因型。头胸部的酯酶仅表现出2个位点:Est-2和Est-3,且这2个位点是纯合基因型。不同个体之间头胸部的酯酶酶谱没有明显的差异,Est-2b和Est-3a普遍存在于角类肥蛛的头胸部和腹部中;腹部的酯酶则存在明显的个体差异,在Est-2和Est-3位点的杂合基因型频率为h<,2>=h<,3>=0.4779。 (3)通过酯酶同工酶酶谱分析了几种圆网蛛总科蜘蛛的遗传关系;根据遗传距离和遗传一致度,以及得出的聚类分析的结果可知,鹤嘴盖蛛与卡氏盖蛛、浅斑近微蛛与食虫沟瘤蛛、日本盖蛛与双线盖蛛之间的遗传关系较近,而角类肥蛛与这些蜘蛛间的遗传关系相对较远。这与传统的形态分类比较一致,说明同工酶分析方法也是系统分析方法中一种有用的分子分析手段。
此外,实验开始阶段还对研磨提取缓冲液的量进行了研究,首先对角类肥蛛、双线盖蛛和波纹盖蛛进行了称重,结果角类肥蛛的平均体重为:0.1196g,双线盖蛛的平均体重为0.0100g,波纹盖蛛的平均体重为0.0062g。研磨时加入的提取液依次分别为:600ul、100ul、100ul。电泳后染色酶谱效果较好,故按照一定个体大小的比例,对角类肥蛛、草间钻头蛛、浅斑近微蛛、食虫沟瘤蛛、鹤嘴盖蛛、卡氏盖蛛、双线盖蛛、波纹盖蛛和日本盖蛛加研磨提取液的量依次为:600ul、80ul、80ul、80ul、100ul、200ul、100ul、 100ul、 120ul。