C型产气荚膜梭菌保护性抗原基因的构建及其免疫原性研究

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C型产气荚膜梭菌是引起动物出血性、坏死性肠炎和肠毒血症的主要病原菌,特别对新生仔猪易出现高致病性和高死亡率,严重影响了我国养猪业的发展。C型产气荚膜梭菌的致病因子是菌体产生的外毒素,其中α毒素、β1毒素和β2毒素是其产生的主要外毒素,是引起仔猪红痢的主要致病因子。 本研究在已经构建β2-β1融合基因的基础上,进一步将亚克隆的α毒素基因融合到β2-β1融合基因的上游,构建了重组质粒pXETAB2B1,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Westernblotting分析,探索了以IPTG为诱导剂优化重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)的表达条件,并且进行了免疫原性研究,结果如下: 1.构建的表达质粒pXETAB2B1经酶切反应鉴定和核苷酸序列分析表明,核苷酸序列与预期的序列一致,成功构建了重组质粒pXETAB2B1。 2.重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PAGE和Westernblotting分析,结果表明,该重组菌株可以表达α-β2-β1融合蛋白,分子量约为95kD,而且表达的融合蛋白能够被C型产气荚膜梭菌抗血清特异性识别。该重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)经IPTG在不同条件下优化表达,其融合蛋白含量占菌体总蛋白最高比例可达31﹪。 3.对重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)进行了免疫原性研究,经动物实验表明,重组α-β2-β1融合蛋白能诱导小鼠产生C型产气荚膜梭菌的特异性中和抗体,构建的重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)不具有生物毒性,而且具有较强的免疫原性,为下一步研制预防仔猪红痢三价基因工程亚单位苗提供了理想基因工程候选菌株。
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