【摘 要】
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本文第一部分进行了毛细管电泳结合氧化锆纳米材料增敏的铜离子催化鲁米诺-过氧化氢化学发光法灵敏检测蛋白质的研究。在十倍稀释的(1/10)人血清基质存在的条件下,选择性地检
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本文第一部分进行了毛细管电泳结合氧化锆纳米材料增敏的铜离子催化鲁米诺-过氧化氢化学发光法灵敏检测蛋白质的研究。在十倍稀释的(1/10)人血清基质存在的条件下,选择性地检测了肌红蛋白、牛血红蛋白以及细胞色素C。研究发现,化学发光试剂溶解在碱性的磷酸盐-硼砂缓冲溶液中能够产生重现的化学发光信号；同时,该信号在进样后引入12.5mm×20mM十二烷基硫酸钠(SDS)区段后得到显著提高。化学发光反应液中加入氧化锆纳米材料后信号进一步增强。实验显示该方法具有较好的选择性和灵敏度,在1/10人血清基质存在的条件下,肌红蛋白、牛血红蛋白以及细胞色素C的检测限(S/N=3)分别为7.8×10-9,3.3×10-9以及1.5×10-9M。该方法对样品的前处理要求较低,分析前只需将样品用去离子水或1/10人血清稀释。采用该方法测得人血样品中的血红蛋白浓度为0.15g/mL。结果表明,毛细管电泳化学发光法可应用于复杂基质存在下的蛋白质的灵敏检测。
本文第二部分对树枝状大分子(PAMAM)作为缓冲溶液的添加剂改善毛细管电泳-紫外法分析蛋白质的分离度和检测灵敏度进行了研究。实验发现,大分子与蛋白质之间存在相互作用并显示出了明显的选择性。实验对缓冲溶液的浓度、pH进行了优化,在pH2.56的10mM的H3PO4和20mM的NaH2PO4缓冲溶液中,不同的蛋白质得到了快速高效的分离。在PAMAM的浓度为5×10-4g/mL时,细胞色素C和转铁蛋白的检测灵敏度提高,检测限(S/N=3)分别为6.7×10-8和2.5×10-8M。同时,肌红蛋白和胰蛋白酶抑制剂的分离度明显提高。实验也采用紫外光谱法对蛋白质和PAMAM的相互作用进行了研究。
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