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本研究旨在探索维生素C对幼建鲤生长、消化吸收能力的影响及其抗氧化的作用关系。通过体内、体外实验相结合的方法,研究了幼建鲤不同发育阶段血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中酶性抗氧化系统指标和非酶性抗氧化物质含量的变化,揭示出幼建鲤不同发育阶段体内抗氧化的变化规律；在此基础上,研究了不同维生素C水平对幼建鲤血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中的抗氧化规律及其作用方式；研究了维生素C对幼建鲤营养物质的沉积效率的影响并确定了需要量；系统深入研究了维生素C对幼建鲤消化器官发育、消化吸收功能的影响；通过细胞模型研究维生素C对幼建鲤肠上皮细胞的增值、分化和抗氧化的影响,探索维生素C对鱼肠上皮细胞氧化的保护作用及其作用方式。主要的研究内容及结果如下：1.不同体重建鲤血液、肌肉、肝胰脏和肠道中抗氧化指标变化规律研究选择体重为18.0±0.2g(平均数±标准差)的健康建鲤750尾,设5个阶段,每阶段150尾,每个阶段3个重复,每个重复50尾鱼。五个阶段均饲喂相同的试验饲粮,试验开始后每阶段间隔14天取样一次,用于测定幼建鲤血清、肝胰脏、肠道和肌肉的抗氧化指标。结果发现：幼建鲤体重对机体、肝胰脏、肠道和肌肉组织中的丙二醛含量和蛋白质羰基含量的影响呈极显著(P<0.01)或显著下降(P<0.05),当体重分别达到60.3g、52.6g.48.6g、50.6g后,相应组织器官中MDA含量降到最低且达到平台值(P>0.05),当体重分别达到68.1g、58.2g、60.4g和63.6g后,相应组织器官中蛋白质羰基含量降到最低且达到平台值(P>0.05)。幼建鲤体重对抗氧化酶性指标SOD、CAT、GSH-Px、GST和GR活性的影响呈极显著(P<0.01)或显著升高(P<0.05),当体重分别达到49.6g、64.3g、43.4g和58.4g后,血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中的SOD活性进入稳定状态(P>0.05);当体重分别达到57.4g、61.6g、63.7g和57.6g后,血液、肝胰脏、肠道和肌肉中的CAT活性达到平台值(P>0.05)；当体重分别达到65.7g、46.8g和51.8g后,血液、肝胰脏和肠道中的GSH-Px活性到道稳定水平(P>0.05),而肌肉中的GSH-Px活性随体重的变化不显著(P>0.05)；而当体重分别达到59.2g和55.1g后,血清和肝胰脏中的GST活性达到平台值(P>0.05)；当体重分别达到40. 1g、40. 1g、31.4g、31.4g后,幼建鲤血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中GR活性达到平台值(P>0.05)。幼建鲤体重对非酶性抗氧化物质GSH含量的影响呈极显著(P<0.01)增加,当体重分别达到58.6g、40. 1g、58.6g后,幼建鲤肝胰脏、肠道和肌肉组织中GSH含量达到平台值(P>0.05)。研究结果说明：幼建鲤机体抗氧化能力随体重变化发生改变,肌肉、胰脏和肠道的变化规律基本一致,在体重较小时达到稳态。这种变化与清除自由基的能力的变化以及抗氧化酶系统和非酶系统的一些指标变化规律是一致的。2.维生素C对幼建鲤生长性能、体蛋白、脂肪和灰分影响选择体重为12.63±0.02 g(平均数±标准差)的健康建鲤900尾。试验设6个处理,每个处理共150尾鱼,每个处理3个重复,每个重复50尾鱼。分别饲畏维生素C含量为Omg/kg、21.4mg/kg、45. 1mg/kg、69.5mg/kg、93.6mg/kg、142. 1mg/kg的试验日粮60天。结果表明：维生素C能够极显著提高幼建鲤特异增长率和摄食量(P<0.01),当饲料维生素C含量分别达到40.9和45. 1mg/kg后,其特异性生长率和摄食量均达到最大且达平台(P>0.05)；维生素C极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)提高幼建鲤蛋白质沉积率、脂肪沉积率和磷的沉积率,当饲料维生素C含量分别达到39.4mg/kg和38.6mg/kg时,蛋白沉积率和脂肪沉积率分别达到最大并达平台值(P>0.05),对灰分和钙的沉积没有显著影响(P>0.05)。研究结果说明：维生素C促进了幼建鲤的生长,提高了饲料蛋白质、脂肪、灰分和磷的沉积效率；以SGR、增重、摄食量、蛋白沉积率和脂肪沉积率为标识,12-80克幼建鲤维生素C的需要量分别为40.9mg/kg、40.6mg/kg、45. 1mg/kg、39.4mg/kg、38.6mg/kg饲粮。3.维生素C与幼建鲤消化吸收能力的关系研究选择体重为12.63±0.02 g(平均数±标准差)的健康建鲤900尾。试验设6个处理,每个处理共150尾鱼,每个处理3个重复,每个重复50尾鱼。分别饲喂维生素C含量为0mg/kg、21.4mg/kg、45. 1mg/kg、69.5mg/kg、93.6mg/kg、142.1mg/kg的试验日粮60天。结果表明：维生素C能够极显著增加幼建鲤肠道和肝胰脏中胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力(P<0.01),当饲料维生素C含量分别达46.9mg/kg,69. 1mg/kg,45. 1mg/kg和44.4mg/kg,48.9mg/kg,48.9mg/kg,44.8mg/kg时,肠道胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶活力以及胰脏胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力分别达到最大并达到平台(P>0.05)。维生素C极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)地提高幼建鲤前、中、后肠的皱襞高度,当饲料维生素C含量达44.5mg／kg时,前肠皱襞高度达最大。维生素C极显著提高幼建鲤前、中和后肠碱性磷酸酶、Na+，K+-ATP酶、γ-GT酶和全肠CK酶的活性(P<0.01),当维生素C含量分别达47. 1mg/kg、47.4mg/kg、48.9mg/kg饲粮时,前、中、后肠的碱性磷酸酶活性达到最高；当维生素C含量分别达到48.5mg/kg、40.8mg/kg、40.7mg/kg饲粮时,前、中、后肠的Na+, K+-ATPase活性达到最大值；当维生素C水平分别达51.0mg/kg、51.5mg/kg、48.4mg/kg饲粮时,前、中、后肠的γ-GT活性最强；当维生素C含量达44.5mg／kg饲粮时,全肠CK的活性达最大。维生素C极显著提高幼建鲤肝胰脏重量,肝体指数,肠重,肠长,肠体指数和肠长指数(P<0.01),当维生素C含量达43.4mg／kg饲粮时,幼建鲤肝胰脏蛋白含量达平台值。维生素C显著影响肠道乳酸杆菌和芽孢杆菌的数量(P<0.01),对嗜水气单孢菌数量没有显著的影响(P>0.05)。研究结果说明：维生素C提高了幼建鲤的消化吸收能力。消化吸收能力提高与维生素C促进了肝胰脏和肠道的生长发育,提高了胰腺胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶分泌能力,提高了肠道吸收面积以及吸收能力,促进了有益菌乳酸杆菌和牙孢杆菌的生长,抑制了有害菌大肠杆菌的生长有关。4.维生素C对幼建鲤不同组织中抗氧化指标的影响选择体重为12.63±0.02 g(平均数±标准差)的健康建鲤900尾。试验设6个处理,每个处理共150尾鱼,每个处理3个重复,每个重复50尾鱼。分别饲喂维生素C含量为0mg/kg、21.4mg/kg、45. 1mg/kg、69.5mg/kg、93.6mg/kg、142. 1mg/kg的试验日粮60天。结果表明：维生素C极显著降低幼建鲤血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中丙二醛(MDA)、蛋白质羰基的含量(P<0.01),当维生素C含量分别达42.9mg/kg、46.6mg/kg、50.4mg/kg和61.4mg/kg饲粮后,血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中的MDA含量下降致最低水平并达到平台值；而血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中的蛋白质羰基含量与饲料维生素C的水平呈显著的线性关系,并随着饲料维生素C的添加呈显著下降(P<0.01)。维生素C极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)提高幼建鲤血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中抗超氧阴离子(ASA)和抗羟自由基(AHR)的清除能力,并且与相应组织中的MDA和蛋白质羰基含量呈极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)的负相关关系;维生素C能够极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)地提高幼建鲤血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中酶性抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽S转移酶(GST)和谷胱甘肽(GR)的活力,相关分析表明,这些酶均与相应组织中的MDA或蛋白质羰基呈极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)的负相关关系。维生素C能够极显著(P<0.01)地提高幼建鲤血液、肝胰脏、肠道和肌肉组织中非酶性抗氧化物质还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,并分别与相应组织中的MDA含量和蛋白羰基含量呈极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)的负相关关系。研究结果说明：随维生素C含量从0-142.1 mg/kg,机体脂质过氧化程度逐步降低,但是肝胰脏、肠道和肌肉组织器官中脂质氧化程度仅在维生素C从0提高到45.1mg/kg时降低,当维生素C含量达到45.1mg/kg饲粮后不再降低,肝胰脏、肠道和肌肉影响规律一致；随维生素C含量从0-142.1 mg/kg饲粮时,幼建鲤机体、肝胰脏、肠道和肌肉组织中蛋白质氧化降低；这与其提高了幼建鲤清除超氧阴离子、羟自由基能力,酶性抗氧化系统中SOD、CAT. GSH-Px、GST和GR酶的活力和非酶性系统中GSH物质的含量有关。5.维生素C对鲤鱼肠上皮细胞增殖分化的影响采用单因子实验设计,试验设计分为6个处理,每个处理设4个重复。选择体重为80g左右的健康鲤鱼制备肠道上皮细胞。对分离的肠上皮细胞进行接种培养72h后分别添加维生素C浓度为0、4、10、16、22、28mg／L的生长液继续培养96h,收集培养液,对相关指标进行分析测试。结果表明：随着维生素C浓度的上升,观察发现贴壁生长细胞数量明显增多,并形成大的细胞集落和成片的单层细胞,细胞个体变大,成明显的椭圆形,轮廓清晰,从MTT OD值也发现,其值随维生素C浓度的增加而上升,到10mg／L后,达到平台值(P>0.05)。维生素C对肠上皮细胞的蛋白含量,碱性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、Na+,K+-ATP酶和乳酸脱氢酶活性有显著的影响(P<0.05)。能够显著增加鲤鱼肠上皮细胞的蛋白合成(P<0.05),当培养液中维生素C的浓度分别达22mg／L和10mg／L后,细胞中总蛋白含量和培养液蛋白含量达到最大并达到稳定值；显著增加鲤鱼肠上皮细胞中碱性磷酸酶的活力(P<0.05),当培养液中的维生素C浓度达16mg／L后,碱性磷酸酶活力不再升高并达到稳定；显著提高鲤鱼肠上皮细胞谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性(P<0.05),当维生素C浓度达16mg／L后,GOT和GPT活性最强且达到平台值：Na+，K+-ATP酶的活性也在维生素C浓度达16mg／L后不再上升,并达到平台值;对乳酸脱氢酶的活性也有显著的影响(P<0.05),当维生素C浓度达22mg／L后活性降到最低。说明：在本试验条件下,维生素C可以提高鲤鱼肠道上皮细胞的增殖和分化成熟。这与维生素C维持了肠上皮细胞膜的完整性、促进氨基酸周转代谢、增加细胞膜转运蛋白Na+, K+-ATP酶活性以及促进了肠上皮细胞的蛋白沉积有关。6.维生素C对鲤鱼肠上皮细胞氧化保护作用的影响采用单因子实验设计,试验设计分为7个处理,每个处理设4个重复。选择体重80g左右的健康鲤鱼制备肠道上皮细胞。对分离的肠上皮细胞进行接种培养72h后按0mg／L(空白对照)、0mg／L+100umolH2O2.4mg／L+100umolH2O2.10mg／L+ 100umolH2O2.16mg／L+100umolH2O2.22mg／L+100umolH2O2和28mg／L+100umolH202设计处理生长液后继续培养16h,收集培养液,对相关指标进行分析测试。结果表明：与空白对照组对比观察发现,经100μmol／L H202处理16h后,细胞数量减少,不规则和轮廓不清楚细胞增多,折光性减弱,贴壁能力降低；而用4、10、16和22mg／LVC处理后,细胞形状、折光性、贴壁能力得到明显改善,并可见大量完整细胞。100umol的H2O2导致肠上皮细胞产生氧化应激,与空白对照相比,显著增加培养液中乳酸脱氢酶的含量(P<0.05),显著降低细胞蛋白含量(P<0.05),细胞生长受阻,细胞结果受到破坏；与空白对照相比,培养液中MDA和蛋白质羰基含量显著增加(P<0.05),清除超氧阴离子和羟自由基的能力显著下降(P<0.05),抗氧化酶的活性和非酶性抗氧化物质的含量显著降低(P<0.05)。在氧化应激状态下通过添加不同浓度的维生素C能够显著降低培养液中MDA和蛋白质羰基的含量(P<0.05)；显著恢复抗超氧阴离子和抗羟自由基的能力(P<0.05),ASA能力恢复至空白对照水平,AHR能力比空白对照水平显著增强(P<0.05):SOD、CAT.GST.GR的活性和GSH含量显著上升(P<0.05),至28mg／L时达到空白对照水平,而GSH-Px活性也显著增强,到28mg／L时达最大,但显著低于空白对照水平(P<0.05)。说明：维生素C对幼鲤鱼肠道上皮细胞的氧化有保护作用,并随水平提高保护作用增强；其保护作用与增强IEC抗超氧阴离子和抗羟自由基能力有关,提高抗氧化酶系统的SOD.CAT.GPx和GST酶活力以及提高非酶系统中的GSH含量有关。综上所述,维生素C对幼建鲤的肠上皮细胞的氧化有保护作用,促进了肠细胞的生长发育和功能正常,促进了幼建鲤消化器官的生长发育,增强了蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶分泌能力和肠刷状缘酶活力,改善了肠道微生态平衡,提高了对营养物质的消化吸收和利用能力,增强了机体、肝胰脏、肠道和肌肉组织的抗氧化能力,促进了幼建鲤的生长发育。