【摘 要】
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目的:研究融合型自杀基因Fcy::Fur在真核细胞中的表达情况,并建立其在人卵巢癌细胞中的稳定表达的细胞株,研究融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对人卵巢癌细胞株(
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目的:研究融合型自杀基因Fcy::Fur在真核细胞中的表达情况,并建立其在人卵巢癌细胞中的稳定表达的细胞株,研究融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)的杀伤作用,为研究融合型自杀基因Fcy::Fur在肿瘤的基因治疗方面的应用奠定基础。方法:(1)应用基因重组技术,将pORF-Fcy::Fur中的Fcy::Fur目的基因亚克隆到荧光真核表达载体pEGFP-N1,以酶切和测序鉴定重组质粒的正确性。(2)应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入SKOV3细胞,并筛选稳定表达细胞株,通过报告基因荧光蛋白的表达、RT-PCR和Western blot检测其融合蛋白在真核细胞中的表达;(3)5-FC作用于稳定表达融合型自杀基因Fcy::Fur的SKOV3细胞株,以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy::Fur转基因细胞的杀伤效应。结果:(1)测序鉴定证明成功构建了重组质粒pEGFP-N1-Fcy::Fur。(2)细胞转染24h后,60%转染细胞发出绿色荧光。(3)经G418筛选后,RT-PCR和Western- blot法检测到Fcy::Fur表达。(4)在稳定表达融合型自杀基因Fcy::Fur的SKOV3细胞株中加入5-FC后,MTT法检测到明显杀伤效应,FCM法检测到显著凋亡峰。结论:融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-FC对人卵巢癌细胞SKOV3有明显的杀伤作用。且随5-FC浓度增加,抑制作用显著增强。
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