【摘 要】
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目的:研究复方山慈菇醇提物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖与凋亡的影响;建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型研究复方山慈菇醇提物体内抗乳腺癌效应。方法:1.不同浓度的复方山慈菇醇提物作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h和72h,CCK-8法检测细胞活力值并计算IC50值,显微镜观察其细胞形态变化。进一步采用Hoechst 33342染色法观察MDA-MB-2
【基金项目】
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项目名称:裸鼠成瘤及药效学评价公共服务平台建设,项目合同编号:15-235-06,项目来源:广西科技基础条件平台建设,项目起止时间:2015-2019
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目的:研究复方山慈菇醇提物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖与凋亡的影响;建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型研究复方山慈菇醇提物体内抗乳腺癌效应。方法:1.不同浓度的复方山慈菇醇提物作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h和72h,CCK-8法检测细胞活力值并计算IC50值,显微镜观察其细胞形态变化。进一步采用Hoechst 33342染色法观察MDA-MB-231细胞凋亡形态,Annexin V-APC/7-AAD双染色流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率变化,JC-1试剂盒检测MDA-MB-231细胞线粒体膜电位改变,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt-C和Caspase-3在MDA-MB-231细胞中的表达。2.建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、阳性药盐酸多柔比星组和复方山慈菇醇提物组高、低剂量组,另取5只正常裸鼠作为正常对照组,每组动物5只。正常对照组和模型组灌胃等体积的羧甲基纤维素钠（CMC-Na）,阳性药组腹腔注射1.25mg/kg盐酸多柔比星,复方山慈菇醇提物组分别以0.9g生药/kg、1.8g生药/kg剂量灌胃;除阳性药组每3天给药一次外,其他各组每天给药一次,连续给药21d。给药期间,每3天观察记录裸鼠的体重,测量瘤径并计算瘤体积。给药21d后,处死裸鼠后剥离移植瘤,称瘤重并计算抑瘤率。HE病理染色观察瘤块组织细胞形态及数量的变化。蛋白免疫印迹法测定瘤块中Bax、Bcl-2、Cyt-C、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达。结果:1.细胞实验中,CCK-8实验结果显示,复方山慈菇醇提物能够浓度依赖性地抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖（P<0.05或P<0.01）,显微镜观察到贴壁细胞数量减少,有皱缩变圆趋势;复方山慈菇醇提物给药24h、48h和72h对MDA-MB-231细胞的IC50值分别为0.51mg生药/m L,0.26 mg生药/m L和0.10mg生药/m L。进一步的研究发现在0.25、0.5和1.0mg生药/m L复方山慈菇醇提物作用24h后,Hoechst33342染色结果显示MDA-MB-231细胞出现典型凋亡样变化;Annexin V-APC/7-AAD双染色法流式结果显示复方山慈菇醇提物浓度依赖性地提高人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡率（P<0.05或P<0.01）;JC-1结果显示:复方山慈菇醇提物浓度依赖性降低线粒体膜电位,红色/绿色荧光的比值随浓度的升高而明显降低（P<0.05或P<0.01）;蛋白免疫印迹实验结果显示:0.5mg生药/m L的复方山慈菇醇提物作用于细胞24h明显上调Bax、Cyt-C和Caspase-3蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,下调Bcl-2的表达（P<0.05或P<0.01）。2.体内实验中,成功构建了人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠皮下移植瘤模型。给药21d后,与正常组相比,模型组和各给药组裸鼠体重均明显减轻（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,阳性药组和复方山慈菇醇提物高、低剂量组能明显抑制肿瘤的生长,明显减少瘤块的质量和体积（P<0.05或P<0.01）,抑瘤率分别为89.67%、67.39%和43.48%。HE染色结果显示,与模型组比较,复方山慈菇醇提物高、低剂量组均能不同程度抑制乳腺癌组织细胞生长:细胞数量减少,呈现炎症和坏死形态;与模型组相比,复方山慈菇醇提物组上调Bax、Cyt-C、Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。结论:复方山慈菇醇提物可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖及裸鼠移植瘤体内生长,其机制可能与诱导线粒体途径的凋亡有关。
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