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枯水(Section-drying)是柑橘贮藏过程中普遍发生的生理病害。果实发病后,果肉水分减少,风味变淡,果实重量明显降低,从而严重影响柑橘产业的经济效益。本试验以椪柑为试材,构建椪柑枯水相关基因的抑制差减杂交cDNA文库,通过对文库的筛选、克隆测序、功能分析以及实时定量RT-PCR验证,获得了椪柑枯水应答基因,这些基因反映了果实对枯水的调控情况,可作为今后防治枯水病害的候选基因。利用抑制性差减杂交技术以椪柑正常果肉cDNA作为对照组(Driver),以枯水果肉cDNA作为实验组(Tester),成功构建了一个正向差减文库,挑选了300个有效克隆进行测序分析,260个测序成功。BLASTx比对分析发现,获得的260条表达序列标签(ESTs)中有63条ESTs同源性较低或没有同源性,有197条ESTs找到了分属于52个功能己知基因的同源序列。这些差异表达基因主要涉及衰老、抗逆防御、几丁质和细胞壁代谢、蛋白降解等过程。以β-actin基因作为内参基因,对文库中编码β-微管蛋白、衰老相关蛋白、细胞色素c、半胱氨酸蛋白酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、转运蛋白、天冬氨酸蛋白酶前体、WRKY转录因子21的基因进行实时定量RT-PCR验证,结果发现：这8个基因均有明显的上调表达。其中编码β-微管蛋白与衰老相关蛋白的基因上调表达8倍左右；编码细胞色素c、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的基因上调表达5倍多；编码半胱氨酸蛋白酶.转运蛋白的基因上调表达2倍左右；而编码天冬氨酸蛋白酶前体、转录因子21的基因表达量均有极明显的上升,分别上升了350倍和120倍。