红褐斑腿蝗免疫体系主要成分及其功能研究

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本文以红褐斑腿蝗Catantopspinguis(Stal)为研究对象,利用机械损伤、注射G75凝胶微珠、体外血细胞短期培养及显微观察等手段,对红褐斑腿蝗的免疫体系进行了研究,并利用蛋白快速层析技术对其中两种主要的体液免疫因子,酚氧化酶(PO)和凝集素进行了初步的分离和性质鉴定。研究结果如下: 1.红褐斑腿蝗血淋巴中,血细胞主要有原血胞、浆血胞、脂血胞、粒血胞、囊血胞、珠血胞和类绛色血胞七种类型。 2.在体外培养的红褐斑腿蝗血细胞培养液中加入G75微珠后2~4h内,血细胞基本完成对G75颗粒的包囊作用。该过程首先由少数粒血胞黏附于微珠表面,破裂释放内含颗粒物质后,诱集大量的其他血胞(主要是浆血胞)来完成包囊。 3.机械损伤可以在一定程度上激活红褐斑腿蝗体内的PPO级联反应,使得PO活力显著上升,与对照组相比差异(极)显著(P<0.01或P<0.05)。注射G75微珠与对照相比,对红褐斑腿蝗体内的PPO级联系统具有显著的激活作用(P<0.01)。 4.经BPT处理后,PO活性显著上升;TIS和PTU虽然对PO活性具有明显的抑制作用,但可被注射G75后proPPO强烈的累积效应在一定程度上抵消。 5.沉淀红褐斑腿蝗体内PO的最适硫酸铵饱和度为30%~50%,但活力损伤较大,回收率仅为9.84%,比活力由0.127U/mg蛋白上升至0.153U/mg蛋白;HiPrep26/10Desalting脱盐后,活力回收率有较大幅度的上升,为61.35%,同时比活力也升至1.3952U/mg;最终经HiPrep16/100SephadexTMG-75凝胶过滤后,活力回收率为11.21%,但比活力则上升至3.6263U/mg,最终纯化倍数为28.55倍。SDS-PAGE电泳检测结果显示为2条蛋白带,分子量分别为64.2kDa和55.3kDa。 6.以注射G75微珠、昆虫生理盐水BIS及针刺作为红褐斑腿蝗凝集素的诱导因子,结果发现,以注射G75微珠效果最佳,体内持续时间最久。在进行糖半抗原专一性抑制研究中,发现两种D-构象单糖(D-半乳糖和D-岩藻糖)对其血凝活力具有明显的抑制作用,而葡萄糖、甘露糖、L-岩藻糖则没有抑制作用。 7.利用固定化鸡红血细胞对红褐斑腿蝗匀浆中凝集素进行吸附后,以D-半乳糖(0.01mol/L)进行解吸附,经HiPrep26/10Desalting脱去半乳糖后,可以去除多数杂蛋白,其血凝效价则由原先的4.484titre/mg上升至129.427titre/mg,活力回收率为34.54%,纯化倍数达到28.864;进一步使用DEAE阴离子交换洗脱后,活力最高的组分血凝效价升至133.315titre/mg,活力回收率为32.44%;纯化倍数达到29.731倍。经10倍浓缩后,SDS-PAGE电泳检验结果,具有两条分子量分别为61.4kDa和55.5kDa。
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