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目的通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察醒脑静、丁苯酞及二者联合应用分别对实验性大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,明确醒脑静、丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用。并通过Bcl-2和Bax表达的变化,探讨其可能的作用机制。方法(1)60只成年雄性wistar大鼠(250±20g)随机分为4组,模型组(n=15)、醒脑静组(n=15)、丁苯酞组(n=15)、醒脑静联合丁苯酞组即联合用药组(n=15)。每组又分为6h、24h、72h三个亚组。(2)大鼠实验性脑缺血再灌注模型(大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型)的制备采用改良线栓法。(3)细胞凋亡的检测采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL);脑缺血再灌注损伤后脑组织形态学检测采用HE染色,光镜下观察的方法;大鼠脑缺血再灌注各个时间点Bcl-2、Bax的表达的检测采用免疫组化法。结果1.HE染色显示:模型组造模侧脑组织结构变得疏松,细胞间质水肿,部分形成空腔,着色变浅。神经细胞个数显著减少,细胞胞体缩小,部分细胞轮廓不清,有不同程度的神经细胞变性、坏死。其中模型组破坏为著,醒脑静组、丁苯酞组神经细胞破坏较轻,联合用药组神经细胞破坏最少。2.TUNEL染色显示:TUNEL阳性细胞数总体趋势是模型组最高,醒脑静组及丁苯酞组不同程度降低,醒脑静联合丁苯酞组最低。丁苯酞组与模型组,联合用药组与模型组及丁苯酞组与联合用药组之间在6h、24h、72h时间点的差异均有统计学意义(P<0.05),而醒脑静组与模型组的比较仅24h时间点上差距有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组化显示:丁苯酞组及联合用药组在6h、24h、72h时间点Bcl-2阳性表达较模型组均有提高。联合用药组Bcl-2阳性表达在各时间点均最高,醒脑静组在各时间点与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。丁苯酞组及联合用药组在6h、24h、72h时间点Bax阳性表达较模型组均有降低(P<0.05)。联合用药组Bax阳性表达在各时间点均最低,与丁苯酞组在各时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。醒脑静组在各时间点与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2于6h明显开始升高,24h达高峰,同时Bax于6h表达较少,24h表达最低;醒脑静联合丁苯酞的联合给药组Bcl-2阳性表达在各时问点均最高。同时Bax阳性表达在各时间点均最低(P<0.05)。结论1.醒脑静、丁苯酞及二者联合均可通过抑制脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡来实现神经细胞保护作用,其中二者联合效果最佳。2.丁苯酞可通过增加脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2表达,减少Bax表达的方式来减少神经细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤。3.醒脑静本身不能对Bcl-2、Bax的表达产生影响,但其可通过增强丁苯酞作用的方式影响Bcl-2、Bax的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤。