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目的:痤疮是一种发生于毛囊及皮脂腺的慢性皮肤疾病,青春期发病率较高,发病率约90%。目前,中医临床上治疗痤疮多采用清热解毒类中药,但并未对其有效成分及作用靶点深入展开研究。黄连作为清热解毒类中药代表,临床上多用黄连配伍治疗痤疮,2015版《中华人民共和国药典》记载黄连具有清热燥湿,泻火解毒功效,外治湿疹,湿疮,痈肿疔疮。因此,明确黄连治疗痤疮的活性物质基础,进一步展开治疗痤疮的机制研究,并研发出新的治疗痤疮外用药是很有必要的。方法和结果:1、收集黄连原药材,酸水渗漉提取得滤液,经浓缩后得到含有黄连生物碱的浸膏。通过不同极性的溶剂对浸膏进行萃取,分为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇及水5个部位。通过高效液相分析可知,正丁醇部位主要为生物碱活性成分,利用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱等方法进行初步划段和进一步分离纯化,通过核磁共振碳谱(13C-NMR)、氢谱（1H-NMR）鉴定化合物结构,最终分离鉴定15个化合物。这些化合物分别是:小檗碱（1）,巴马汀（2）,非洲防己碱（3）,黄连碱（4）,表小檗碱（5）,药根碱（6）,木兰花碱（7）,格兰地新（8）,8-氧化黄连碱（9）,13-甲基小檗碱（10）,阿魏酸（11）,4-O-阿魏酰基奎尼酸甲酯（12）,5-羟甲基糠醛（13）,邻苯二甲酸二甲酯（14）,邻苯二甲酸二丁酯（15）。2、为确定黄连抗痤疮的活性物质基础,对分离出的7种主要生物碱单体进行体外抑制人皮脂腺细胞（SZ95细胞）雄性激素合成的活性筛选。通过酶联免疫（ELISA）实验筛选出抑制SZ95细胞5α-双氢睾酮合成及雄激素受体表达的活性成分。结果表明,黄连活性成分对SZ95细胞5α-双氢睾酮合成有不同程度的抑制作用,但巴马汀抑制作用最明显,且呈浓度依赖性。进一步通过ELISA实验发现巴马汀在高浓度下能明显地抑制雄激素受体的表达（P<0.05）。3、基于以上结果,本课题对巴马汀抑制SZ95细胞5α-双氢睾酮合成的机制进一步展开研究。通过流式细胞仪检测巴马汀对SZ95细胞凋亡和周期的影响;荧光定量PCR仪检测巴马汀对SZ95细胞Ⅰ型5α-还原酶（Srd5α1）mRNA的表达;为确定巴马汀抑制SZ95细胞雄性激素合成后,是否进一步抑制细胞质脂质合成,通过尼罗红染色观察巴马汀对SZ95细胞质中脂质积累的影响,并通过western blot实验验证其是否基于PI3K/AKT,MAPK途径抑制细胞质脂质合成。结果如下:经过不同浓度的巴马汀处理后,对细胞周期或凋亡并没有影响;而当睾酮刺激SZ95细胞后,Srd5α1 mRNA的表达明显增强,不同浓度巴马汀处理后,高浓度条件下Srd5α1 mRNA的表达明显降低（P<0.05）。尼罗红染色荧光显微镜下观察得,经过睾酮和亚油酸共同刺激下荧光明显增强,说明SZ95细胞质脂质积累增多,但经过巴马汀处理后,SZ95细胞质脂质积累显著降低;PI3K,AKT,SREBP-1c,p-P38,p-JNK,p-ERK等蛋白与脂质合成密切相关,本实验利用western blot实验检测相关蛋白的表达,发现巴马汀能显著下调SREBP-1c,PI3K,p-AKT,p-P38,p-JNK,p-ERK蛋白表达（P<0.05）,因此巴马汀可能是基于PI3K/AKT途径和MAPK途径抑制脂质合成。4、根据体外实验筛选出抑制SZ95细胞雄性激素合成活性强的巴马汀,制备富含巴马汀的活性部位,进行产品的综合设计和研发。通过对基质进行考察和筛选,最终制得黄连祛痘软膏,并考察外观性状及稳定性。实验结果表明:黄连祛痘软膏延展性好、稳定性好。5、为进一步研究黄连祛痘软膏抗痤疮的疗效,选用金黄地鼠进行体内实验验证。实验过程设计空白组（NC）,模型组（TC）,阳性药物组,黄连制剂组,巴马汀组,采用睾酮对金黄地鼠背部皮脂腺斑造模。30 d后,取血处死,取血清用酶联免疫法测定各组间血清中双氢睾酮的含量;H&E染色观察皮脂腺斑组织形态变化,免疫组化法检测皮脂腺中雄激素受体的表达,油红O染色观察皮脂腺中脂质积累。结果显示:给药后,黄连祛痘软膏组、巴马汀组都有抗痤疮作用,其皮脂腺斑面积减小,皮脂腺排列疏松,液化小囊增多,且雄激素受体表达水平显著下降,脂质积累明显降低,但各组间血清中双氢睾酮含量并无显著性差异。综上所述,本文对黄连进行了提取、分离和纯化,对得到的7种主要生物碱进行体外活性筛选及初步阐明了黄连活性成分—巴马汀抑制人皮脂腺细胞雄性激素合成机制。体外实验结果表明巴马汀能够显著抑制人皮脂腺细胞雄性激素5α-双氢睾酮的合成,主要是通过抑制Ⅰ型5α-还原酶的表达,而不是通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞周期。另外,巴马汀通过下调SREBP-1c途径相关蛋白的表达抑制雄激素分泌过多刺激脂质积累。动物实验表明巴马汀及黄连祛痘软膏对睾酮诱导的痤疮模型具有抗痤疮作用,为黄连治疗因皮脂腺雄性激素分泌过多引起的痤疮提供理论基础。