论文部分内容阅读
川乌为祛风除湿,温经止痛之品,药用历史悠久,四川、云南、陕西等地均有栽培,以四川江油为道地产区。然川乌有大毒,需炮制后使用。从古至今川乌的炮制方法有炮、炒、蒸、煮、加辅料或不加辅料等多种方法,目前最常用的是蒸法或煮法,2015版《中华人民共和国药典》(以下简称《药典》)中记载制川乌为“取净川乌,大小个分开,用水浸泡至内无干心,取出,加水煮沸4～6小时(或蒸6～8小时)至取大个及实心者切开内无白心,口尝微有麻舌感时,取出,晾至六成干,切片,干燥”,全国及各省地方炮制规范也均有对川乌炮制方法的记载。虽然对川乌炮制的文献记载颇多,却各有差异,成品饮片质量控制方面多是以主观控制,导致不同的操作者判断程度不一致,造成饮片质量差异增大,有些甚至为了降低毒性出现过度炮制的现象。本文通过制川乌的实验研究及生川乌产地生产情况,首先进行炮制过程中影响质量因素的分析,再针对这些因素提出解决办法,以最终保证制川乌饮片的质量稳定可控。全文主要包括以下方面：第一部分：文献综述对川乌从古至今的炮制方法进行了梳理,整理出其中过程控制方法,对现代川乌药材及饮片的产地因素进行了分析,为后续的实验研究奠定基础,过程控制方法的总结有利于对炮制程度的理解,物质基础的总结对分析影响饮片质量的因素奠定基础。对《药典》中收载的成方制剂使用川乌的情况进行了汇总,了解现代川乌临床使用情况。第二部分：实验研究1.不同产地多批次中试制川乌饮片质量研究通过中试将实验室炮制放大到生产,对中试10批次制川乌样品的分析,找寻影响制川乌饮片质量稳定的因素。取四川江油与陕西汉中两产地10批次川乌,在四川江油完成中试,采用HPLC法展开对制川乌中的6种生物碱含量是否符合《药典》规定,以及基于指纹图谱技术对制川乌饮片质量的分析研究。结果显示不同产地的原药材间存在的差异,且该差异会引起制川乌饮片产生差异,故针对原药材中生物碱含量的不同,宜根据具体情况作出工艺参数的调整。同时,炮制时仅依靠传统性状判断炮制终点无法保证制川乌饮片的质量,是否可以通过在《药典》规定的4～6h内延长煮制时间控制其含量的高低值得进一步研究。指纹图谱的分析,为制川乌饮片质量控制提供更完全的数据支持。2.制川乌质量的影响因素研究在中试研究的基础上,展开炮制过程中可能影响制川乌质量稳定因素的研究,包括对不同年限川乌原药材的考察,加热方式的考察及加热时间的考察。总结出影响制川乌质量稳定的因素包括以下几点：1、川乌原药材的质量；2、炮制时的加热方式；3、炮制时间。了解川乌加热过程中生物碱的水解变化规律,对制备合格的、质量稳定的制川乌十分必要。该部分通过对蒸1-l0h制川乌生物碱含量分析,得出单、双酯型生物碱在10h内的水解变化规律,双酯型生物碱基本在蒸制1h内迅速水解,而单酯型生物碱呈现波动升高再波动降低趋势。选择蒸法炮制减少因水煮造成的成分流失,更能准确的分析水解规律。不同浓度的辅料醋均对川乌炮制过程中生物碱的水解产生影响,通过采用5%-50%浓度不等的米醋炮制川乌,结果煮法炮制加辅料醋可使单酯型生物碱含量提高14%-82%；蒸法炮制加辅料醋可使单酯型生物碱含量提高8%-67%。醋制川乌可以作为一种新的川乌炮制方法,解决生产上制川乌单酯型生物碱含量达不到《药典》要求的问题,以10%醋蒸制川乌最为适宜。采用不同浓度的米醋炮制川乌,制品酯型生物碱含量呈波动变化,该变化机理仍有待进一步研究。采用液质联用技术发现生川乌中有99个成分,制川乌中有106个成分,对川乌炮制前后的化学成分分析,结果川乌炮制前后共有成分53个,其中已指认的有裸翠雀亭、去氢松果灵、准格尔乌头碱、尼奥灵等42个成分,炮制后消失46个成分,已指认的有翠雀它灵等9个成分,新增53个成分,已指认的有焦乌头碱等13个成分。通过液质联用的分析能够更深入的了解川乌经炮制后化学成分的变化情况,该变化与川乌毒性和药效的变化之间的关系有待进一步研究。经对前面中试及小试研究数据的整理分析,提出控制制川乌饮片质量稳定的方法：拟合了生物碱含量与炮制时间的数学模型,通过检测川乌原药材的生物碱含量初步预估适宜的炮制时间,建立制川乌的动态工艺。既根据原药材的质量选择合适的炮制方法与时间,以此保证制川乌的质量稳定可控。3.生川乌片制备制川乌饮片的质量研究四川江油是川乌的道地产区,但经调研发现近两年川乌多以“片”的形式进行产地储存和销售,市场的供求变化体现了川乌原产地加工形式发生了变化,但《药典》中并未记载生川乌片制备制川乌片的方法与规范。该部分研究则通过对制川乌片生物碱含量与炮制时间的相关性研究以及特征图谱研究,找寻制川乌片的炮制最佳方法与时间等工艺参数,并将结果与《药典》法制川乌相对比,阐释制川乌片的可行性,最终利用多元统计分析建立制川乌片中单、双酯型生物碱含量与炮制时间的数学模型,使炮制时间和炮制程度的控制客观化。制备蒸制1-8h和煮制1-6h(间隔为1h)的制川乌,检测6种生物碱的含量,分析制川乌片中单、双酯型生物碱的总量随炮制时间的变化规律。结果生川乌片制备的制川乌双酯型生物碱含量均在炮制1h达到《药典》规定的不超过0.040%的限量要求,且内无白心,但此时麻舌感强烈,随炮制时间延长,麻舌感逐渐减弱。蒸2-8h制品单酯型生物碱含量符合《药典》的0.070%～0.15%的含量要求,在蒸5h达最高,较生品升高约142%；煮制品均低于《药典》规定的含量范围。以制川乌传统质量和生物碱含量要求为指标,经生物碱的含量测定、特征图谱及多元统计结果综合分析,生川乌片制备制川乌片选用蒸法炮制4-6h为宜,并且可根据建立的数学模型进一步预估适宜的炮制时间。综上所述,本研究从多方面分析了影响制川乌饮片质量的因素,并通过实验研究提出相应的解决办法,为制备质量合格且稳定可控的制川乌饮片奠定基础。