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作为最重要的抑癌基因之一，p53通过影响编码细胞周期相关蛋白质基因的表达来调控细胞周期的G1和G2/M期阻滞，DNA损伤严重不能修复，则诱导细胞发生凋亡。p53抑癌功能丧失的主要方式是基因突变，但有50﹪的肿瘤具有野生型p53，这些表达野生型p53的肿瘤中p53蛋白失活的机制多年来一直困扰着人们。最近p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的发现为解决这一难题开辟了新的思路。
目的：
通过观察比较不同浓度的多种化疗药物处理肿瘤细胞株A549和A375p前后ASPP2和iASPP表达的变化，探讨ASPP家族蛋白表达状态在调控肿瘤细胞的化疗反应性，特别是DNA损伤性化疗药物诱导的细胞凋亡过程中的作用。
方法：
MTT法筛选三种药物(顺铂，CDDP；吡柔比星，THP；β-榄香烯，β-Ele)的最小有效浓度，初步检测各药物对A549和A375p细胞的生长抑制情况；用MTT法筛选出的最小有效浓度处理两种细胞，24小时后流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率，同时辅以透射电镜观察各处理组细胞的形态变化；免疫荧光观察药物处理前后iASPP的表达变化；RT—PCR测定不同处理组ASPP2基因mRNA的表达。实验数据用SPSS统计软件处理，均数比较用方差分析(ANOVA)，非参数比较用WilCOXon秩和检验，P<0.05认为有统计学意义。
结果：
各处理组MTT 检测结果显示：CDDP和β-Ele对A549和A375p细胞的生长抑制作用均有良好的剂量和时间依赖性，THP的剂量依赖性不明显。FCM测定不同处理组细胞凋亡情况显示，3.0μg/ml的CDDP、1.25μmol/l的THP和50.0μg/ml的β-Ele分别处理两种细胞，24小时后，各处理组均有凋亡峰出现，CDDP、THP和β-Ele各组与对照组均有显著差别(P<0.01)，CDDP和THP处理组不同细胞间差别显著，CDDP处理组A549细胞凋亡较A375p细胞明显(P<0.01)，而THP和β-Ele处理组A549细胞凋亡不如A3 75p细胞明显(P<0.01；P<0.05)；透射电镜下观察，未经药物处理的肿瘤细胞核圆、形态规则，核仁清晰，染色质分布均匀，细胞膜完整；经药物作用后各组均可见凋亡细胞，核膜皱缩内陷不规则，染色质边集，呈新月状分布于核膜下；THP组可见染色质浓缩、边集明显，并伴有典型凋亡小体形成，同时可见有少量坏死细胞。免疫荧光显示，未加药物处理的A549和A375p细胞胞质染色均匀呈亮绿色，核区较暗；CDDP及β-Ele处理组细胞为暗绿色，其中可见皱缩的凋亡细胞；THP处理的细胞胞质荧光弱呈灰绿色，由于THP嵌入DNA自发红色荧光与二抗的绿色荧光中和，胞核被染成桔红色，结果提示药物处理后A549和A375p细胞中iASPP的表达有不同程度的下降。对ASPP2基因mRNA的RT-PCR产物分析表明，CDDP和THP处理A549和A375p细胞后ASPP2表达量增加(P=0.029，P=0.001；P=0.047，P<0.001)，ASPP2的相对表达量改变在两种细胞中差异不显著(P=0.876，P=0.25)；β-Ele处理后，A375p细胞中ASPP2的表达量增加(P=0.01)，但A549细胞中ASPP2的表达量改变不明显(P=0.185)。结论：
本实验选取两种表达野生型p53的肿瘤细胞株A549和A375p，不同药物处理后，结合多种方法对ASPP家族的表达进行检测，根据实验结果作出结论如下：CDDP、THP和β-Ele对两种表达野生型p53的肿瘤细胞株A549和A375p的生长都有明显的抑制作用，CDDP和THP都可诱导A549和A375p凋亡。未处理的A549和A375P均表达ASPP2和iASPP基因，表达量差异不明显；CDDP和THP处理后ASPP2表达上调，而iASPP的表达下调，提示ASPP家族表达的变化是CDDP和THP抗肿瘤效应的机制之一。