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根据世界卫生组织提供的诊断标准,病人脑组织中致病性PrP的检出是进行克- 雅氏病(Creutzfeldt-Jakob diseaseCJD)最终诊断的依据之一.为此他们利用人工合成PrP 多肽链制备特异性PrP抗体.所用多肽为人PrP蛋白质N端17个氨基酸残基,在2i戊二醛作用 下与载体牛血清白蛋白偶联,经纯化及与佛氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔.ELISA检测所 制备的多肽抗体效价可达1:32万,Western blot结果显示该抗体可以和原核表达的人全长及不同长度缺失的GST-PrP融合蛋白反应.免疫荧光技术显示多肽抗体能够识别在真核细胞内 表达的全长及194位密码子终止突变的PrP蛋白.进一步实验还显示此抗体可以和人、鼠、兔脑组织的正常PrP以及人、地鼠病理的、具有蛋白酶K抗性的PrP发生反应.这种良好的免疫反应性使其能够有效地应用于克-雅氏病的临床诊断和实验室研究.为了检测羊瘙 因子263K毒脑内接种于金黄地鼠.除去机械意外死亡,89.5i的实验动物(17/19只)于80-108天的潜伏期后,陆续发病.解剖病鼠,取出脑组织,分别进行常规福尔马林固定、新鲜组织印片及冷冻保存.利用HE染色、免疫组织化学和Western blot等技术对病鼠的脑组织进行了研究.他们利用PCR扩增出人PrP基因外显子I及其上游序列,克隆入pUC18载体中,序列分析发现其为GC富含序列.将此段序列插入pBLCAT6载体,瞬时转染不同组织来源的细胞系,检 测了CAT的相对表达值.利用<32>P标记的带有细胞转录激活因子Sp1结合位点的寡核苷酸与多种细胞的细胞蛋白进行条移动实验,检测细胞内源性Sp1含量.结果显示,Sp1在不同细胞中的含量差别很大,主要存在于上皮类细胞,神经细胞中含量较低.因此推测Sp1在Prp基因转录的组织特异性调节中不起主要作用.