Ⅰ.哺乳动物精子中GABA能系统若干功能及其调控研究;Ⅱ.环境雌激素调控斑马鱼肝脏F-box基因的表达

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ZYYZH
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第Ⅰ部分:哺乳动物精子中GABA能系统若干功能及其调控研究   我们实验室对哺乳动物中的GABA能系统进行了较长时间研究,取得了一定的研究进展,其中包括证实GABA及其受体参与调节精子顶体反应的发生。本文主要研究的是GABAc受体。除脑神经组织外,我们在大鼠睾丸中克隆到GABAc受体亚基的全长cDNA序列,并证实睾丸中存在GABAc受体。大鼠的很多组织均表达GABAc受体,其中视网膜和睾丸中表达量最高。随着大鼠睾丸的发育,GABAc受体p3亚基表达水平逐渐上升。免疫组织荧光检测显示,GABAc受体在大鼠睾丸中定位于变态精子区域,在精子上定位于头部和尾巴上。同时通过研究GABAc受体对精子运动和精子顶体反应的影响,结果发现GABAc受体能够介导精子顶体反应的发生,而对精子运动没有影响。在克隆GABAc受体亚基时发现了它的多种拼接变异体,在人、大鼠、小鼠睾丸中均存在不同形式的拼接变异体,这可能是GABAc受体表达调控的一个特点。   我们对精子中GABA受体是否能保护精子,免受氧化应激的伤害进行了研究,同时还对可能避免男性不育的几种抗氧化剂的作用进行了研究,结果发现GABA对保护精子具有一定的作用,但作用并不十分显著,而丙酮酸和α一酮戊二酸的保护作用比GABA更加有效,它们可以用于精子培养液中的抗氧化剂组分。   第Ⅱ部分:环境雌激素调控斑马鱼肝脏F-box基因的表达   环境雌激素严重影响着人类的健康,雌激素不仅能影响生殖和发育过程,而且雌激素与肝脏肿瘤的发生也有很大关系。F-box蛋白是泛素连接酶(E3)的组分,而泛素连接酶(E3)参与调控多条细胞信号通路,为了研究雌激素是否通过调控F-box基因的表达,来影响肝癌细胞的增殖,本文以斑马鱼作为研究对象,将其置于含有EE2(17α-乙炔雌二醇)环境下养育,用real-time PCR对斑马鱼肝脏中的多个F-box蛋白基因表达水平进行了定量分析。对两个已知的marker基因进行了检测,证实卵黄蛋白原mRNA水平大幅度上调,细胞色素P450-1Al mRNA水平下调。我们发现F-box基因Skp2、FbxL2、Ppaa、FbxL22,Fbxo5在雄性斑马鱼中上调幅度显著高于雌性斑马鱼,而FbxL18在雌性斑马鱼中上调幅度明显高于雄性斑马鱼。Wsb1在雌性和雄性斑马鱼中均明显上调。Fbxo9在雌性斑马鱼中表达水平上调,而在雄性斑马鱼中表达水平下调。Skp2、Ppaa、Fbxo5、FbxL18的表达水平随EE2浓度升高呈钟形曲线变化,FbxL2、FbxL22的表达水平随EE2浓度升高呈上升趋势,Wsb1在雌性斑马鱼中呈钟形曲线,而在雄性斑马鱼中呈上升趋势。综上所述,EE2能够改变斑马鱼肝脏中多个F-box基因的表达水平,这为揭示泛素连接酶(E3)和肝脏肿瘤发生之间的关系,提供了线索。  
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