论文部分内容阅读
目的:本研究拟通过比较顺铂用药前后,凋亡诱导因子编码基因(apoptosis inducing factor mitochondria associated 1,AIFM1)发生特定突变的阳性型C57BL/6J小鼠与野生型C57BL/6J小鼠的听功能和内耳结构损伤差异,以进一步探究AIFM1基因发生特定突变后其听功能发生病变的机制。方法:选取2月龄听力正常(短声刺激诱发听性脑干反应阈值在25~35dBSPL)的Aifm1基因特定突变阳性C57BL/6J雄鼠32只和野生型C57BL/6J雄鼠36只,其中32只Aifm1基因突变雄鼠作为阳性顺铂组,36只野生型鼠随机分为野生型顺铂组(26只)和野生型生理盐水组(10只)。阳性顺铂组和野生型顺铂组按10mg/Kg的剂量连续3天腹腔注射给顺铂,野生型生理盐水组按体重连续3天腹腔注射同剂量的生理盐水,并在给药前、给药后第1天、给药后第2天、给药后第3天和给药后第5天检测并记录各组小鼠短声刺激诱发听性脑干反应(Click-evoked Auditory Brainstem Response,Click-ABR)的阈值和各波潜伏期值(90d BSPL),以及频率特异性听性脑干反应(tone burst auditory brainstem response,tb-ABR),包括tb-2KHz、tb-4 KHz、tb-8 KHz、tb-16 KHz和tb-32KHz处的阈值。并在完成最后一次听力检测后立即活杀取耳蜗,将固定、脱钙好的耳蜗进行石蜡包埋和HE染色观察耳蜗螺旋神经节损伤情况,并且通过基底膜铺片结合免疫荧光染色观察内、外毛细胞和内毛细胞下带状突触的损伤情况。结果:(1)ABR阈值变化:在给药后不同时间点阳性顺铂组和野生型顺铂组的Click-ABR和各tb-ABR阈移值均比野生型生理盐水组明显,并且不同时间点阳性顺铂组的Click-ABR和各tb-ABR阈移值也均比野生型顺铂组更加明显,各组间差异均有统计学意义,且随给顺铂次数的增加和时间的推移,组间差异更加显著。(2)Click-ABR各波潜伏期变化:在给药后不同时间点阳性顺铂组和野生型顺铂组的Click-ABR各波潜伏期延长均比野生型生理盐水组明显,组间差异均有较显著的统计学意义;而在给顺铂后,不同时间点阳性顺铂组Click-ABR各波潜伏期延长也基本均比野生型顺铂组更加明显,且主要是III波和V波潜伏期值延长,组间差异有统计学意义。(3)Click-ABR各波间期变化:在给药后不同时间点阳性顺铂组和野生型顺铂组的Click-ABR各波间期(I-III、III-V和I-V波间期)延长均比野生型生理盐水组明显,组间差异有统计学意义;而在给顺铂后,不同时间点阳性顺铂组Click-ABR各波间期延长也均比野生型顺铂组更加明显,其中主要是III-V波间期延长值组间差异有统计学意义。(4)形态学结果:给药后第五天,野生型顺铂组和阳性顺铂组的耳蜗各回外毛细胞的缺失、内毛细胞下突触前膜CtBp2蛋白数量的减少和螺旋神经节细胞的缺失均比野生型生理盐水组明显,且底回的变化均比顶回、中回更加明显;阳性顺铂组的耳蜗各回上述形态变化也均比野生型顺铂组更加明显,且外毛细胞各回的缺失数量组间差异均有统计学意义。结论:顺铂具有明显的耳毒性,主要对外毛细胞、内毛细胞下突触结构和螺旋神经节细胞造成不可逆的损伤,引起严重的ABR阈移、Click-ABR各波潜伏期和Click-ABR各波间期明显延长,且其耳毒性具有明显的剂量累积效应和后遗效应;Click-ABR各波潜伏期和Click-ABR各波间期的改变比Click-ABR阈值变化对损伤因素的作用更加敏感,能更早的反映听功能的损伤情况;在顺铂的作用下,Aifm1基因特定突变的阳性小鼠的内耳结构和听功能损伤均比野生型小鼠更加严重;AIFM1基因特定突变导致AIF蛋白氧化还原功能的下降或缺失,可能是临床上发生该类突变的遗传性听神经病患者的主要发病机制之一。