论文部分内容阅读
本文将鸭α-干扰素真核表达质粒（pcDNA-SDIFN-α）以每只1、3、6μg三个剂量用基因枪轰击法和以每只50、100、200μg三个剂量用肌肉注射法分别免疫28日龄鸭，所有鸭15 d后接种鸭瘟（DP）弱毒疫苗，同时设空载体质粒pcDNA3.1（+）对照组、DP弱毒对照组和空白对照组，接种后第3、7、14、21、28、35、49、63、84、105 d采抗凝血用淋巴细胞增殖试验（MTT法）测定鸭外周血T淋巴细胞转化；第7、14、21、28、35、49 d采抗凝血用流式细胞仪（FACS）测定CD3*T淋巴细胞数量的动态变化；第7、14、21、28、35、49、63、84、105、126、154、182 d采凝血用间接ELISA法和中和试验检测血清抗体水平；12 h、24 h、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、49 d、63 d、84 d采抗凝血用荧光实时定量PCR检测血液中DPV-DNA含量。获如下结果：1．T淋巴细胞对ConA的反应能力（OD值） pcDNA-SDIFN-α以不同剂量、不同途径免疫鸭后，再免疫DP弱毒，在第3 d时，T淋巴细胞对ConA的反应能力就明显高于弱毒对照组、空载体对照组和空白对照组，28 d达到峰值。其中实验组极显著（P≤0.01）或显著（P≤0.05）高于弱毒对照组、空载体对照组和空白对照组；空载体对照组和弱毒对照组显著（P≤0.05）高于空白对照组；空载体对照组略高于弱毒对照组但无显著差异（P≥0.05）。2．CD3+淋巴细胞数量在第7 d时，鸭外周血CD3+T淋巴细胞数量明显增多，实验组鸭外周血CD3+T淋巴细胞数量均极显著（P≤0.01）或显著（P≤0.05）高于弱毒对照组、空载体对照组和空白对照组；空载体对照组和弱毒对照组显著（P≤0.05）或极显著（P≤0.01）高于空白对照组；空载体对照组略高于弱毒对照组但无显著差异（P≥0.05）。3．外周血抗体IgG水平（OD值）在第7 d时，除空白对照组外，所有组鸭血清抗体水平都迅速升高，在28 d时达到高峰。1、3、6、200μg免疫组鸭血清抗体IgG均显著（P≤0.05）或极显著（P≤0.01）高于弱毒对照组、空载体对照组和空白对照组；50和100μg免疫组稍高于弱毒对照组和空载体对照组，但无显著差异（P≥0.05）；弱毒对照组和空载体对照组间鸭血清抗体水平无显著差异（P≥0.05），但极显著（P≤0.01）或显著（P≤0.05）高于空白对照组。4．外周血中和抗体效价实验组、弱毒对照组和空载体对照组鸭都产生了特异性鸭瘟抗体，其抗体中和效价在28 d时达到峰值。其中1、3、6、200μg免疫组抗体的中和效价高于50、100μg免疫组、弱毒对照组和空载体对照组的抗体中和效价。5．外周血DPV-DNA的含量除空白对照组外，所有组鸭外周血液中DPV-DNA在12 h即可检测到，其中12 h-49 d极显著（P≤0.01）高于空白对照组，DPV-DNA拷贝数的数量级基本上为3.5-4.2。实验组、弱毒对照组和空载体对照组鸭外周血液中DPV-DNA含量无显著差异（P≥0.05）。综上所述，pcDNA-SDIFN-α提前15 d免疫能使DP弱毒疫苗诱导的T淋巴细胞转化能力增强，CD3+T淋巴细胞数量的增多，血清抗体IgG水平和中和抗体效价的升高，是一种良好的增强DP弱毒疫苗细胞免疫和体液免疫的分子佐剂，pcDNA-SDIFN-α肌肉注射200μg／只、基因枪轰击1μg／只的效果最佳。pcDNA-SDIFN-α经不同途径、不同剂量免疫鸭后对DPV在鸭外周血中的增殖无影响。不同途径免疫pcDNA-SDIFN-α对DP弱毒苗激发的细胞免疫应答方面，基因枪轰击法优于肌肉注射法；而在体液免疫应答方面，肌肉注射法优于基因枪轰击法。