基于CysLTs通路探讨三子养亲汤控制哮喘的机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:lele3383
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目的:基于CysLT s通路探讨三子养亲汤抑制哮喘模型小鼠哮喘症状的的机制方法:采用4-8周的C57BL小鼠65只,均为雌性,分为正常组和实验组。正常组小鼠4只,实验组分为中药三子养亲汤高中低三个组,西药孟鲁司特组,造模组。中药组35只,西药组5只,模型组20只,模型组分为对照组和雾化组,对照组5只。中药组和西药组眼球取血法取血。采用先将造模组小鼠于实验第1天和第14天于腹腔内注射0.1%卵白蛋白生理盐水加氢氧化铝凝胶混合液(二者比例为1:4,PH7.4)。每只小鼠注射lml。正常组注射0.9%生理盐水lml。后将造模组小鼠置于自制玻璃箱内,用5%卵蛋白生理盐水5m1进行雾化激发,每日激发1次,每次激发30min,共激发共14天。中药组小鼠SZ-H组、SZ-M组、SZ-L组分别以10.8g·kg-1·d-1,5.4g·kg-1·d-1、2.7g·kg-1·d-1的三子养亲汤中药汤剂lml灌胃(相当于成人用量的10倍、5倍、2.5倍换算),西药组小鼠运用孟鲁司特0.004g·kg-1·d-1药量lml进行灌胃。用HE染色法观察肺组织,确定造模成功,并对造模小鼠的支气管上皮细胞和平滑肌细胞进行分离。用酶联免疫法(ELISA法)检测小鼠肺组织匀浆中EOT-1、EOT-3的含量,小鼠平滑肌细胞中IP3和DAG的含量。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR法)检测小鼠平滑肌细胞中CysLTR1mRNA、CysLTR2mRNA的表达。结果:1、一般表现:正常组小鼠反应灵敏,精神状态较好,活动自如,呼吸平稳,摄食饮水良好,皮毛有光泽,体重逐渐增加。模型组小鼠在第7天表现出精神不振,第14天精神状态明显变差,呼吸急促,动作迟缓,喜蜷缩在一起,皮毛稀疏无光泽,摄食饮水量较正常组下降,在造模后前小鼠体重基本不增加。各给药组小鼠精神较好,呼吸较平稳,毛色光泽度良好,反应较迅速病理情况:正常组:肺泡结构正常,支气管粘膜上皮无脱落、变形,未见炎性细胞聚集于腺体增生,无炎性渗出。哮喘模型组:支气管粘膜出出现大量上皮细胞脱落、变形,可见大量炎性细胞聚集成团,嗜酸性粒细胞增多明显,肺泡内聚集大量的杯状细胞,肺泡壁变红肿胀,肺泡壁变薄,个别肺泡腔扩大。3、CysLTRlmRNA和CysLTR2mRNA:与模型组相比,西药组,中药中剂量组小鼠细胞中白三烯1基因表达降低,具有显著的统计学意义(p<0.05),中药高剂量组小鼠细胞中白三烯1基因表达明显降低,具有非常显著的统计学意义(p<0.01),提示,西药组,中药高剂量组,中药中剂量组所使用的药物或治疗方法具有下调小鼠细胞中白三烯1基因表达的作用;中药低剂量组小鼠细胞中白三烯1基因表达无明显差异,不具备统计学意义。与模型组相比,西药组,中药高剂量组,中药中剂量组,中药低剂量组小鼠细胞中白三烯2基因表达无明显差异,不具备统计学意义。4、EOT-1和EOT-3:与模型组相比,西药组,中药高剂量组小鼠细胞上清液中Eotaxin-1浓度明显降低,具有非常显著的统计学意义(p<0.01),中药中剂量组小鼠细胞上清液中Eotaxin-1浓度降低,具有显著的统计学意义(p<0.05),提示:西药组,中药高剂量组,中药中剂量组所使用的药物或治疗方法具有下调小鼠细胞上清液中Eotaxin-1浓度的作用;中药低剂量组小鼠细胞上清液中Eotaxin-1浓度无明显差异,不具备统计学意义。与模型组相比,西药组,中药高剂量组小鼠细胞上清液中Eotaxin-3浓度明显降低,具有非常显著的统计学意义(p<0.01),中药中剂量组小鼠细胞上清液中Eotaxin-3浓度降低,具有显著的统计学意义(p<0.05),提示:西药组,中药高剂量组,中药中剂量组所使用的药物或治疗方法具有下调小鼠细胞上清液中Eotaxin-3浓度的作用;中药低剂量组小鼠细胞上清液中Eotaxin-3浓度无明显差异,不具备统计学意义。5、IP3和DAG:与模型组相比,西药组,中药高剂量组小鼠细胞上清液中IP3浓度明显降低,具有非常显著的统计学意义(p<0.01),中药中剂量组小鼠细胞上清液中IP3浓度降低,具有显著的统计学意义(p<0.05),提示:西药组,中药高剂量组,中药中剂量组所使用的药物或治疗方法具有下调小鼠细胞上清液中IP3浓度的作用;中药低剂量组小鼠细胞上清液IP3浓度无明显差异,不具备统计学意义。与模型组相比,西药组,中药高剂量组,中药中剂量组中药低剂量组小鼠细胞上清液DAG浓度无明显差异,不具备统计学意义。结论:1、三子养亲汤能降低哮喘小鼠模型肺组织匀浆中EOT-I和EOT-3的含量。2、三子养亲汤能降低哮喘小鼠模型平滑肌细胞中CysLTRImRNA和IP3的含量。3、低剂量OVA可以制作出符合痰哮表现的哮喘模型。4、三子养亲汤控制哮喘作用机制之一是通过抑制白三烯通路来发挥作用的。
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