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实验目的:构建聚乳酸羟基乙酸(Poly lactic acid-co-glycolic acid，PLGA)聚合物载药微球，并通过玻璃体腔内注射载药微球，研究其作为贝伐单抗药物载体在BN大鼠脉络膜新生血管疾病(Choroidal neovascularization，CNV)应用的安全性及有效性，旨在提高药物的生物利用度，减少注射频率，降低操作相关并发症及治疗费用，从而提高治疗效果。 实验方法:通过喷雾干燥及固/油/水(S/O/W)法制备PLGA-Bevacizumab微球，动态光散射(Dynamic light scatter，DLS)和扫描电镜(Scan electronicmicroscope，SEM)分析及观察微球的粒径分布及表面形貌;BCA蛋白定量试剂盒检测微球载药量;体外释放实验考察贝伐单抗从PLGA-Bevacizumab微球中的释放行为，酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测体外释放样品中的Bevacizumab浓度;十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodiumdodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)检测载药微球在制备过程中药物分子有无断裂或聚合;圆二色谱(Circular dichroism，CD)检测体外释放样品中药物分子的三级结构的稳定性;细胞实验检测S/O/W法制备的PLGA-Bevacizumab微球的体外活性。在体实验，选用80只8-10周成年雄性Brown Norway(BN)大鼠，动物随机分为3组，实验组和原药组用810nm激光诱导双眼CNV模型，造模1周后，实验组左眼玻璃体腔内注射5μlPLGA-Bevacizumab微球(O-b)混悬液（实际含药量78μg）;原药组左眼玻璃体腔内注射5μl Bevacizumab注射液的生理盐水稀释液（实际含药量78μg）;对照组大鼠不做光凝处理，用来评价材料的生物相容性，左眼玻璃体腔内注射5μlPLGA-BSA微球混悬液作为对照组。每一组动物右眼仅注射5μl生理盐水作为空白对照。眼底拍照及眼底荧光素钠血管造影(Fundus fluorescein angiography，FFA)观察CNV造模后光斑处新生血管及其渗漏情况，使用光学相关断层扫描(Opticalcoherence tomography, OCT)及视网膜电图(Electroretinogram，ERG)技术检测视网膜的层次结构及功能变化。在眼内注射后1周、2周、3周和4周，每组随机选取大鼠处死后摘取眼球行石蜡切片，苏木精-伊红染色(Hematoxylin andeosin staining，HE)观察组织学改变。分别于术后1周、2周、3周和4周，每组选取3只大鼠，肌肉麻醉后进行心脏采血、前房穿刺抽取房水，处死后摘取眼球，分离视网膜、玻璃体、脉络膜及巩膜，用ELISA方法检测各组织中的贝伐单抗浓度。通过考察PLGA-Bevacizumab微球在大鼠体内各组织的药物分布情况，评估载药微球的体内缓释效果，通过眼底造影及病理学观察，评估微球的治疗效果。 实验结果:SEM显示S/O/W法制备的PLGA-Bevacizumab微球O-b尺寸较为均一，平均粒径为1933.8±64.0nm; BCA蛋白定量试剂盒检测微球载药量为10.80％。体外释放实验表明微球O-b在12小时内释放较快，之后持续缓慢释放至38天，SDS-PAGE检测发现第1天、25天、35天的样品和贝伐单抗注射液比较，轻链和重链的分子量未发生变化;CD结果显示，和贝伐单抗注射液比较，发现第1天和25天的分子的三级结构曲线较贝伐单抗轻微降低，但峰形及位置无变化;细胞实验证实，PLGA-Bevacizumab微球O-b处理组和Bevacizumab注射液处理组的VEGF检测量较未处理组明显下降，说明PLGA-Bevacizumab微球O-b能结合VEGF，使游离的VEGF浓度降低。CNV大鼠玻璃体腔注射，实验组和原药组，眼内均未观察到明显炎症，和自身对照眼比较，FFA检查发现荧光渗漏减弱，OCT检查表明视网膜结构和厚度逐渐接近正常，HE染色结果示CNV面积缩小，且RPE细胞和感光细胞层结构较为完整，视网膜层次的结构及厚度较接近光凝前，与OCT图像结果一致。ERG检测结果表明，实验组治疗眼暗适应最大混合反应b波的平均波幅在注射后2周为354.83μv，较自身对照眼的237.83μv接近基线水平;原药眼治疗眼暗适应最大混合反应b波的平均波幅在注射后2周为408.25μv，较自身对照眼的230.25μv接近基线水平;体内药物代谢动力学显示，实验组治疗眼在给药后2周，视网膜出现最大浓度(Cmax)，为0.45ng/mg，并维持缓慢持续的释放，直至4周仍能检测到微量药物，其浓度为0.20ng/mg;而原药组治疗眼在给药后1周，视网膜出现最大浓度(Cmax)，为0.87ng/mg，两周之后检测不到药物浓度。 实验结论:S/O/W法制备的PLGA-Bevacizumab微球O-b体外释放时间延长到38天;细胞实验证实载药微球能与内皮细胞释放的VEGF结合，降低游离VEGF的浓度;体内实验表明其在大鼠眼后段的生物相容性良好，无明显毒性及并发症，利于改善CNV大鼠的血管通透性，为其作为Bevacizumab眼内给药载体提供了可能。