白介素1β活体小鼠分子光学成像系统的建立及应用piggyBac转座子介导的活体小鼠基因捕获系统的建立

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:davidfeng2009
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为了研究IL-1β在炎症相关疾病中的作用以及建立一种针对IL-1β的抗炎筛选模型,我们利用转基因技术获得由人的IL-1β上游调控区(约4.5kb)驱动的报告基因荧光素酶表达载体的转基因小鼠;然后通过活体成像系统呈现小鼠体内的荧光信号。我们尝试了几种典型的炎症模型,包括内毒素休克、急性关节炎、迟发型超敏反应;另外,在两种模型上测试了地塞米松的抗炎效果。结果表明,克隆的人IL-1β上游启动子在转基因小鼠中能够驱动荧光素酶的表达。此种转基因小鼠的荧光能够随着有关炎症因子的刺激而发生变化。本研究证实这样的小鼠能够在整体上反映有关炎症因子对IL-1β的作用情况,而且这样的一种模型可以作为一种炎症药物筛选和评价模型。  有文献报道piggyBac(PB)转座子在小鼠和其它脊椎动物系统中能够进行高效的转座。我们通过转基因技术获得一种在雄性小鼠的生殖系统中表达PB转座酶的含有PB携带polyA(EG)基因捕获载体的小鼠,然后将这种小鼠与野生性雌鼠交配得到含有不同插入位点的突变小鼠。通过设计,利用动物体表荧光发光方法可以方便地筛选到插入在基因内任何位置的突变物种。数据表明,平均10只EGFP-PCR阳性的小鼠中有2.69只发生了位点变化。具有绿色荧光的小鼠,其基因捕获载体的确插入在基因内部,而且载体上EGFP基因方向与内源性基因的阅读框方向一致;没有荧光的EGFP基因PCR阳性的小鼠,其基因捕获载体没有插在基因内,或EGFP基因方向与内源性基因的阅读框方向相反。本文证实了PB转座因子能够介导基因捕获载体在小鼠生殖系统内进行大规模的基因捕获,建立了一种筛选成功插入基因内部产生基因突变小鼠的便利手段,对于揭示大量基因序列所对应的基因功能具有重要应用价值。
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