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背景和目的室管膜下区Ch AT+神经元是新近发现的一群位于室管膜下区并表达胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,Ch AT)的胆碱能神经元,其空间结构扁平,细胞长轴平行于室管膜表面,能够通过低频率自主动作电位释放乙酰胆碱,进而直接、独立地调控正常大脑室管膜下区神经干细胞增殖。本研究以脑梗死为背景,观察脑梗死后室管膜下区Ch AT+神经元的表达及功能变化,进而探讨其与脑梗死后室管膜下区神经发生的关系及可能机制。方法1实验动物及分组选择清洁级4~5周龄雄性昆明小鼠224只,体重25~30g。按照随机表法随机分为5组:(1)假手术组(sham-operated group,n=36),(2)脑梗死组(MCAO-operated group,n=49),(3)脑梗死+多奈哌齐组(MCAO+Donepezil group,n=50),(4)脑梗死+溶剂组(MCAO+Vehicle group,n=39),(5)脑梗死+多奈哌齐+PD173074组(MCAO+Donepezil+PD173074 group,n=50)。2脑梗死模型及检测指标采用改良线栓法制作小鼠大脑中动脉闭塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)模型;自模型成功日起,药物或溶剂持续干预10天;分析各组小鼠体重变化和m NSS神经功能缺损评分;应用免疫荧光和(或)western blot技术检测室管膜下区胆碱能神经元标记物Ch AT及VACh T,神经前体细胞标记物Mash 1及DCX,细胞增殖标记物Ki67。3统计学分析采用SPSS Statistics 21.0统计软件包进行统计学分析,结果以均数±标准差(Mean±SD)表示。采用t检验(student’s t-test)分析两组间差异;采用重复测量方差分析(ANOVA)伴最小有意义差异(least significant difference,LSD)分析多组间差异。p<0.05为差异具有统计学意义。结果1术后各组小鼠体重均明显下降,自术后第3天,各组小鼠体重均开始有不同程度恢复。脑梗死+多奈哌齐组小鼠体重较脑梗死组和脑梗死+多奈哌齐+PD173074组恢复快,差异有统计意义(p<0.05);脑梗死+多奈哌齐+PD173074组小鼠体重恢复较脑梗死组缓慢,差异有统计学意义(p<0.05);脑梗死组小鼠体重恢复与脑梗死+溶剂组相比无统计学差异(p>0.05)。神经功能缺损评估显示脑梗死+多奈哌齐组小鼠在各评估时间点m NSS分值低于脑梗死组和脑梗死+多奈哌齐+PD173074组,差异有统计意义(p<0.05);脑梗死组小鼠在各评估时间点m NSS分值低于脑梗死+多奈哌齐+PD173074组,差异有统计意义(p<0.05)。2 MCAO术后10天,免疫荧光结果显示脑梗死组小鼠室管膜下区可观察到Ch AT免疫阳性细胞(Ch AT+细胞),脑梗死组室管膜下区VACh T表达较假手术组显著增多,差异有统计学意义(p<0.05);western blot结果显示脑梗死组室管膜下区Ch AT、VACh T及DCX蛋白表达水平较假手术组明显增高,差异有统计学意义(p<0.05)。3免疫荧光和(或)western blot结果显示脑梗死+多奈哌齐组室管膜下区Ki67、DCX及Mash 1的表达较脑梗死+溶剂组显著增加,差异有统计学意义(p<0.05)。4免疫荧光和(或)western blot结果显示脑梗死+多奈哌齐+PD173074组室管膜下区Ki67、DCX及Mash 1的表达较脑梗死+多奈哌齐组显著减少,差异有统计学意义(p<0.05)。5免疫荧光结果显示脑梗死+多奈哌齐+PD173074组VACh T的表达较脑梗死+多奈哌齐组有增多的趋势。结论1脑梗死后室管膜下区Ch AT+神经元表达及功能上调,伴随局部神经干细胞增殖增多。2脑梗死后室管膜下区Ch AT+神经元可能通过成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)信号通路促进局部神经发生过程。