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目的:探讨离体人表皮干细胞热损伤后的微小RNA(miRNA)的差异表达;并预测差异表达miRNA的靶基因及其参与的信号通路,为进一步研究创面愈合的机制及相关靶向治疗提供新的线索。方法:(1)应用胰酶消化法分离并培养离体人原代表皮干细胞。(2)将细胞随机分为2组,将实验组细胞置于51.5℃水箱中孵育35s,对照组细胞置于37℃恒温水箱中孵育35s,放置于倒置相差显微镜下,观察两组细胞的形态及生长情况。37℃培养箱中再培养6h后收集细胞样本,用于提取总RNA。(3)应用TRIzol法提取两组样本细胞的总RNA,随后采用RNeasy Mini Kit对RNA进行纯化及质检,以1ug Total RNA≥50ng small RNA起始量进行文库构建,并用Agilent 2200TapeStation进行文库质检;质检后文库,按照HiSeq 2500操作指南中要求制备上机样本;使用Single Read Flow Cell,按照Hi Seq 2500 User Guide的指示进行Hi Seq 2500上机测序;得到测序结果;(4)对差异表达mi RNAs进行miRNA家族分析及相关生物信息学分析。。结果:(1)倒置相差显微镜下观察可见,表皮干细胞刚接种时贴壁牢固,形状小而圆,折光性好。培养2d后,细胞克隆生长较快,贴壁牢固,对照组37℃水浴后细胞数量未见明显减少,细胞外形呈类圆形,贴壁牢固。实验组53.5℃水浴后细胞数量明显减少,细胞呈不规则外形,贴壁欠牢固;(2)测序结果显示,两组细胞差异表达的miRNA共54个,其中表达上调的33个,表达下调的21个。其中上调最明显的为hsa-mi R-1973,下调最明显的为hsa-miR-4520-5p。差异表达明显上调的miRNA还有hsa-miR-4485-3p,hsa-miR-548j-5p,hsa-miR-212-3p,hsa-miR-4461;下调的miRNA有hsa-miR-4661-5p,hsa-miR-191-3p,hsa-miR-129-5p,hsa-miR-147b,hsa-mi R-6868-3p;(3)通过对显著差异表达的miRNA家族分析,探索其所属的miRNA家族的分布情况,结果显示差异miRNA家族为:mir-4520,mir-548,mir-132,mir-4510,mir-191,mir-129,mir-549,mir-154,mir-7641,mir-1976,mir-147,mir-6511,mir-154,mir-744,mir-1287,mir-3064,mir-1295,mir-1248,mir-181,mir-193,mir-1294,mir-149,mir-515,mir-506,mir-338,mir-17,mir-486,mir-431,mir-4504,mir-29,mir-134,mir-221,mir-194,mir-6511;miRNAs靶基因预测及相关生物信息学分析结果提示,差异表达的miRNAs参与细胞增殖分化、生长凋亡、粘附迁移等生物学过程。结论:1、离体人表皮干细胞热损伤后miRNAs表达谱存在明显差异;2、差异表达的miRNAs可能参与调控创面愈合过程。