“还精煎”及拆方调控p53、p66Shc干预卵巢早衰的实验研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong519
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目的:本文以上海市中医老年医学研究所“精血虚衰”“肾生精”理论指导延缓衰老的前期研究为基础,以环磷酰胺诱导的卵巢早衰模型小鼠为研究对象,观察中药“还精煎”优化配方及其拆方对卵巢早衰小鼠激素水平、卵巢颗粒细胞衰老凋亡相关因子的影响,探讨“还精煎”优化配方通过干预p53、p66shc表达治疗POF的作用和机制。  方法:8周龄大雌性C57小鼠50只,随机分为空白组、模型组、还精煎优化配方组(还精煎组)、还精煎温阳拆方组(温阳方组)以及还精煎滋阴拆方组(滋阴方组),每组10只。空白组不做任何干预,还精煎组、温阳方组和滋阴方组用环磷酰胺(终浓度70mg/kg)腹腔注射7天造模。之后模型组给予生理盐水灌胃,还精煎组给予“还精煎”优化配方中药灌胃,温阳方组给予“还精煎”温阳拆方中药灌胃,滋阴方组给予“还精煎”滋阴拆方中药灌胃。除空白组外,其余各组在中药干预期间,每周补充环磷酰胺腹腔注射一次。中药干预期间观察各组小鼠精神状态、摄食、动作、毛色等一般情况。30天后取材。采用HE染色观察小鼠卵巢组织病理学改变;酶联免疫吸附试验(ELISA法)观察小鼠血清雌二醇E2、卵泡刺激素FSH水平变化;免疫组化法观察颗粒细胞相关因子AMH、INH-α、INH-β及衰老相关因子p53、p66shc在卵巢组织中的表达变化。  结果:①模型组小鼠死亡2只,小鼠精神萎靡,动作迟缓无力,摄食减少,身体消瘦,毛色无光泽;还精煎组、温阳方组和滋阴方组小鼠精神状况、身体消瘦情况有所改善。其中“还精煎“优化配方组小鼠改善尤为明显。  ②HE染色结果显示,POF模型组小鼠卵巢间质萎缩,空隙增大,炎症细胞侵润,闭锁卵泡增多,正常卵泡减少,各级卵泡数量下降,颗粒细胞水肿、凋亡;还精煎组及温阳方组、滋阴方组小鼠上述病理特征明显改善,其中尤以还精煎组和温阳方组改善更为明显,颗粒细胞凋亡和炎症显著缓解,闭锁卵泡数量下降而正常卵泡数量显著增多。  ③环磷酰胺造模后,与空白组相比,模型组小鼠血清雌激素E2水平明显降低,促卵泡生成素FSH明显升高,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);中药干预后,与模型组相比,还精煎组、滋阴方组、温阳方组血清E2表达水平明显升高,FSH表达水平均明显降低,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);与还精煎组比较,温阳方组、滋阴方组E2、FSH水平变化均具有显著统计学意义(P<0.01);与温阳方组比较,还精煎组和滋阴方组E2、FSH水平差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。  ④与空白组相比,模型组小鼠卵巢组织颗粒细胞相关因子AMH、INH-α、INH-β水平均明显降低,差异具有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,还精煎组、温阳方组和滋阴方组AMH、INH-α、INH-β表达水平均明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);与还精煎组比较,温阳方组INH-β水平、滋阴方组AMH、INH-β水平变化均具有显著统计学意义(P<0.01),温阳方组和滋阴方组INH-α水平改变均具有统计学意义(P<0.05);与温阳方组比较,滋阴方组AMH、INH-α水平差异均具有统计学意义(P<0.05)。  ⑤与空白组相比,模型组小鼠卵巢组织衰老相关因子p66shc、p53表达水平均明显上升,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);中药干预后,与模型组相比,还精煎组、温阳方组和滋阴方组p53、p66Shc表达水平均明显下降,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);与还精煎组比较,温阳方组和滋阴方组p53、p66Shc水平表达差异不明显(P>0.05);与温阳方组比较,滋阴方组p66shc水平表达差异具有统计学意义(P<0.05)。  结论:还精煎优化配方及其温阳、滋阴拆方能明显改善环磷酰胺所致POF模型小鼠激素表达水平和颗粒细胞衰老凋亡状况;还精煎优化配方及其滋阴、温阳拆方可能通过调节p53、p66Shc蛋白表达,改善卵巢颗粒细胞生长,促进AMH、INH-α、INH-β的表达,从而对环磷酰胺所致的卵巢早衰起到治疗作用。
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