【摘 要】
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目的:杀菌肽,又名杀菌/渗透性增强蛋白(bactericidal/Permeability-increasing protein,BPI),是在中性粒细胞中发现的一种阳离子抗菌糖蛋白,分子量为55KD,具有选择性杀伤革兰
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目的:杀菌肽,又名杀菌/渗透性增强蛋白(bactericidal/Permeability-increasing protein,BPI),是在中性粒细胞中发现的一种阳离子抗菌糖蛋白,分子量为55KD,具有选择性杀伤革兰氏阴性细菌(G-菌),中和内毒素,抑制血管内皮细胞增生等功能.研究发现BPI的N端片段具有与BPI同等的功能.目前BPI已被认为是极有发展前途的新一代高效杀菌、中和内毒素和抑制血管增生的药物蛋白.本课题在毕赤酵母中进行了BPI N端活性片段的分泌表达.采用RT-PCR方法,从慢性粒细胞白血病患者的外周血白细胞中扩增得到长度约1.5kb的BPI的cDNA,将其克隆至pUCm-T载体中,然后从质粒pUCm-BPI上PCR扩增得到编码BPI氨基端196个氨基酸的基因片段BPI 588,将BPI588克隆到表达载体pPIC9K上,使其准确融合于α-交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-.对筛选出的酵母重组子的基因组DNA作PCR分析,证实BPI588基因已整合到毕赤酵母染色体基因组中后,用甲醇作诱导物在29℃进行诱导培养,接着对总RNA作RT-PCR分析,并对分泌到培养基中的表达产物作对革兰氏阴性细菌E.coli JM109的抑菌实验.结果显示,有转录产物mRNA的存在,且表达产物能够抑制革兰氏阴性细菌的生长.该研究表明利用毕赤酵母进行杀菌/渗透性增强蛋白N端片段的分泌表达是可行的,为提高其表达量和中下游的产业化打下了基础.
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