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体细胞核移植(克隆)可以为畜牧业、医学以及生命科学基础科学研究提供丰富的素材，为遗传资源保存、良种扩繁、珍稀动物拯救、转基因动物生产、人类疾病模型制备等带来了希望。猪不仅是具有重要经济价值的农业动物，而且由于其遗传、解剖和生理学等方面与人相似，加之饲养管理技术成熟、多胎，伦理问题少，寿命较适中，可以弥补小鼠作为人类疾病动物模型的很多不足，猪正日渐被视作一种理想的模式动物，所以猪的体细胞克隆意义更大。体细胞克隆猪虽已问世十余年，但效率仍然很低，根本原因是供体核表观遗传修饰重编程不彻底。利用包括组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）在内的表观修饰剂，如TSA、Scriptaid、VPA等处理核移植供体细胞和/或胚胎，可以促进猪克隆胚胎的早期发育。罗米地辛(Romidepsin，FK228)是一种环肽类HDACi，可有效抑制HDAC1和HDAC2活性，提高组蛋白乙酰化水平，影响基因转录活性。但是，至今尚没有关于利用FK228干预克隆胚重编程的报道。因此，本研究拟通过FK228处理，探讨其对供体细胞生长和克隆胚胎体外发育的影响，以期为提高猪体细胞克隆效率，丰富表观修饰干预手段，为深入揭示组蛋白乙酰化对胚胎发育的影响及机制奠定基础。具体试验及结果如下： 试验一： FK228对猪胎儿成纤维细胞生长的影响。使用含0μM、0.05μM、0.1μM、1μM FK228的细胞培养基，在对猪胎儿成纤维细胞处理24h、48h、72h后，监测受试体细胞的形态学变化、生长及存活状态、细胞凋亡情况以及染色体数目是否正常。结果发现，0.1μM FK228处理24h组的供体细胞形态变化不明显，存活数最多，且细胞染色体数目正常率无显著变化。 试验二： FK228处理供核细胞对克隆胚胎体外发育的影响。供核细胞经含0μM（对照组）、0.05μM、0.1μM、1μM FK228的培养基处理24h后，用于生产猪体细胞克隆胚胎，采集各组克隆胚胎融合率、卵裂率、囊胚形成率、囊胚总细胞数等信息。结果发现，在FK228浓度为0.1μM、1μM时，其融合率均显著高于对照组；而各组间的卵裂率无明显差异；0.1μM组的囊胚率最高；0.1μM和1μM组的囊胚总细胞数都高于对照组。结果表明，供体细胞在经0.1μM FK228处理24h后，有益于克隆胚早期发育。 实验三： FK228处理猪体细胞克隆胚胎对其体外发育的影响。在胚胎培养基PZM-3中分别添加0（对照组）、0.05、0.1、1、5、50和100μM的FK228，随机将体细胞克隆胚放入上述不同培养组中，处理24或36h，收集卵裂、囊胚、囊胚总细胞数等数据，以评价各组克隆胚发育效率和质量。结果显示，0μM、0.05μM、0.1μM、1μM FK228等组克隆胚胎处理24h，无论是卵裂率、囊胚率，还是囊胚总细胞计数，各组间都无显著差异，但是随处理浓度增大均呈上升趋势；若处理时间不变，仅将FK228浓度增加到5μM、50μM及100μM时，各组间的卵裂率仍无显著差异，但除对照组外，其他各组均未有囊胚形成；若FK228的处理浓度不变，仍维持0μM、0.05μM、0.1μM、1μM，将处理时间延长至36h时，各组间卵裂率虽无显著差异，但囊胚率在0.1μM时最高，1μM时最低。同时，囊胚总细胞计数随FK228处理浓度增大逐渐提高，并在0.1μM时显著高于对照组。因此，0.1μM FK228处理克隆胚36h可以改善胚胎早期发育。 试验四：FK228既处理供体细胞和又处理克隆胚胎对胚胎体外发育的影响。根据上述实验结果，选用0.1μM FK228处理24h的供体细胞进行体细胞核移植，然后再用0.1μM FK228处理克隆胚胎36h。胚胎体外发育结果显示，与对照组相比，联合处理组克隆胚仅卵裂率有显著提高，而其融合率、囊胚率以及囊胚总细胞计数均无显著差异。结果表明，联合处理没有协同促进猪克隆胚胎发育的作用。 综上所述，使用0.1μM FK228单独处理供体细胞24h、或单独处理克隆胚胎36h，均有助于促进猪体细胞克隆胚胎体外发育，但是如果在供核细胞培养阶段处理和克隆胚胎培养初期都用FK228处理，反而失去促进作用。总之，本研究首次揭示了组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对猪供体细胞（胎儿成纤维细胞）和克隆胚胎发育的作用，为进一步研究FK228在这方面的作用提供了理论依据，并奠定了坚实的基础。