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缺血性股骨头坏死是骨科常见病,疑难病,其发病慢、病程长、致残率高,严重影响了患者的工作和生活。针对该病,至今仍无强效、可靠的治疗药物。复活胶囊处方是本院老中医在多年的临床实践中总结出来的经验方,由川断、骨碎补、鹿角胶、熟地黄、炮姜、木瓜、独活、白芥子、川朴、肉桂、麻黄、甘草十二味药组成,具有补肝益肾、活血止痛、抗股骨头坏死的功效。大量的临床观察证明其抗股骨头坏死疗效确切。我院制剂室已将其制成丸剂用于临床,但丸剂服用量大且以前的提取制备工艺欠合理。为尽可能多地保留有效成分、提高疗效,同时减小服用量,方便用药,本课题通过优选提取和成型工艺将该方制备成胶囊剂并进行了质量标准的研究,主要内容如下:目的:1.利用正交试验设计优选提取、除杂和挥发油包合工艺并在半成品中加入适当辅料制粒,填充胶囊。2.采用薄层色谱法,选择适当的展开剂,建立复活胶囊中熟地黄、川断和骨碎补的定性鉴别方法。3.采用高效液相色谱法,建立川断皂苷Ⅵ和柚皮苷的含量测定方法;采用紫外分光光度法,建立总多糖的含量测定方法。方法:采用正交试验筛选制备工艺。1.以加水量、提取时间和提取次数作为考察因素,以多糖含量和干膏得率为指标,优选熟地黄、肉桂、白芥子、麻黄、甘草的水提工艺;以水提液的浓度、絮凝剂的加入量和絮凝温度作为考察因素,以多糖保留率和干膏得率为指标,优选水提液的ZTC+1絮凝除杂工艺。2.以乙醇浓度、加醇量、提取时间和提取次数作为考察因素,以川断皂苷Ⅵ含量、柚皮苷含量和干膏得率的综合评分为指标,优选川断、骨碎补、独活、厚朴和木瓜的醇提工艺。3.以粉碎度、加水量、浸泡时间和提取时间作为考察因素,挥发油的收率为指标,优选炮姜的挥发油提取工艺。以挥发油与β-环糊精的比例、包合温度和包合时间作为考察因素,以油利用率和包合率的综合评分为指标,优选挥发油的包合工艺。4.对半成品的理化性质进行考察,然后筛选辅料、优选制粒工艺。5.熟地黄的定性鉴别:使用硅胶GF254薄层板,以乙酸乙酯-石油醚(60～90℃)(1:1)为展开剂,在紫外灯(254nm)下检视;川断的定性鉴别:使用硅胶G薄层板,以正丁醇-醋酸-水(4:1:5)的上层溶液为展开,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;骨碎补的定性鉴别:使用硅胶G板,以二甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水(1:10:2.5:3)的上层溶液为展开剂,以三氯化铝溶液为显色定,紫外灯(365nm)下检视。6.含量测定:(1)高效液相色谱法:参考相关文献选择合适的固定相,调整流动相的组成、配比、流速以及柱温,在最大吸收波长下测定,使指标峰分离完全、理论塔板数符合要求;紫外分光光度法:选择合适的显色方法和测定波长。(2)线性范围考察:配置系列浓度的对照品溶液,以色谱峰峰面积为纵坐标,以进样浓度为横坐标(紫外分光光度法以吸收度为纵坐标,以测定液浓度为横坐标),进行线性回归,得回归曲线并考察线性范围。(3)方法学考察:分别考察测定方法的精密度、重现性、稳定性和加样回收率。(4)样品含量测定:取3批复活胶囊样品分别制备供试品溶液,测定指标成分的含量。结果:通过正交试验筛选的最佳制备工艺为:1.水提部分最优提取条件为加10倍量水,提取3次,每次1.5小时;ZTC+1絮凝除杂的最优条件为药液比10:1,絮凝温度为80℃,加药量为2%。2.醇提部分的最优提取条件为加8倍量60%乙醇,回流提取3次,每次1小时。3.挥发油的最佳提取条件为粉碎成细粉,加10倍量水,浸泡1小时,提取10小时;挥发油的最佳包合条件为油:β-环糊精(1:10),在60℃包合3个小时。4.将提取液干浸膏粉与鹿角胶分别粉碎过80目筛,混合,加入20%的微晶纤维素,以95%乙醇为润湿剂制软材,过20目筛制粒,60℃干燥,整粒。挥发油包合物粉碎过40目筛后与上述颗粒混合、填充即得。5.熟地、川断和骨碎补的TCL图谱清晰,样品溶液在与对照药材溶液相应的位置上,均显相同颜色的斑点,阴性对照溶液显示无干扰。6.柚皮苷的色谱条件为:Diamond(250mm×4.6mm,5um)色谱柱,流动相:甲醇-水-冰醋酸(42:55:3),流速1.0ml/min,柱温:30℃,检测波长283nm。回归曲线为y=539.84x+10.634,r为0.9997,柚皮苷在0.21ug～1.51ug范围内线性关系良好。该方法精密度、重现性和在8小时内稳定性的RSD分别为0.56%、0.71%和1.23%,平均加样回收率为99.14%,RSD为0.95%。样品中柚皮苷的含量不低于1.10mg/粒。7.川断皂苷Ⅵ的色谱条件为:Diamond(250mm×4.6mm,5um)色谱柱,以水-乙腈(70:30)为流动相,流速1.0ml/min,柱温:30℃,检测波长212nm。回归曲线为y=4.1379x+13.706 ,r=0.9996,川断皂苷Ⅵ在50.04～417ug/ml范围内线性关系良好。方法学考察表明,该方法精密度、重现性和在8小时内稳定性的RSD分别为0.99%、1.06%和1.16%,平均加样回收率为99.3%,RSD为0.84%。样品中川断皂苷Ⅵ的含量不低于4.50mg/粒。8.多糖的含量测定采用苯酚-硫酸法显色,在最大吸收波长490nm处检测,回归曲线为y=0.0017x-0.0053,相关系数为r=0.9997,多糖量按葡萄糖计在192～480ug范围内线性关系良好。方法学考察表明,该方法精密度、重现性和供试品在8小时内稳定性考察的RSD分别为0.62%、1.78%、1.51%,平均加样回收率为99.78%,RSD为1.03%。样品中总多糖的含量不低于9.4mg/粒。结论:通过正交试验确定了复活胶囊的最佳提取工艺和成型工艺,该工艺稳定、可行、有效成分含量高。建立的薄层鉴别方法专属性强,斑点清晰,可对制剂中的中药进行准确鉴别;高效液相色谱法和紫外分光光度法进行含量测定,准确度高、专属性强、重现性好,可对制剂质量进行有效控制。