论文部分内容阅读
有研究表明猴子体细胞克隆不能成功的主要原因是在于卵母细胞去核的过程中同时去除了对纺锤体形成至关重要的分子,如NuMA等物质。本研究主要是观察微管及NuMA蛋白在猴-兔早期异种重构胚中的变化及功能以及卵母细胞的活化状态对重构胚的影响。研究发现,大部分重构胚融合后,立即就有微管聚集在体细胞核周围,说明随着猴成纤维细胞移入到去核兔卵胞质受体中,体细胞的中心体也一同移入进去并发挥作用。当猴体细胞移入到未活化的(即延迟活化)卵胞质中,供核发生早熟染色体凝集(PCC),瞬间纺锤体形成,然后形成两个类原核结构,而当体细胞移入到预活化的胞质后却很少发生PCC,一般只形成一个不断膨大类原核。虽然延迟活化组融合率、2-8细胞发育率及囊胚得率均高于预活化组,但是在统计学上差异没有显著性。在这两组中,均仅有三分之一左右的胚胎纺锤体和染色体排列是正常的。当猴成纤维细胞与去除NuMA和核物质的兔卵胞质融合后,原位于供核中的NuMA出现在重构胚类原核内,然后逐渐移向第一次有丝分裂纺锤体的两端。将NuMA抗体注入到重构胚中,会导致纺锤体组装及染色体排列的异常,但胚胎的早期分裂不受影响。以上结果说明:(1)猴成纤维细胞中的NuMA在去核的兔卵母细胞中能够参与正常的纺锤体的形成;(2)当猴体细胞核进入到预活化或延迟活化的去核兔卵胞质时,虽然形态的变化不同,但是胚胎的发育情况并没有显著性差异;(3)尽管纺锤体组装和染色体排列的异常是引起克隆低效率的原因,但这些异常对胚胎早期的细胞分裂没有显著影响。
此外,还观察了NuMA,染色体,微管等物质在兔卵母细胞成熟过程及兔克隆胚第一个细胞周期中的动态变化。在兔卵成熟过程中,微管先出现在生发泡周围,GVBD后,微管聚合成条束状紧密地与凝集的染色体连接,在减数分裂中期,组装成纺锤体。在兔克隆胚中,成纤维细胞进入到去核卵后,在供核周围就开始有微管组装,然后瞬间纺锤体、类原核及第一次有丝分裂中期纺锤体依次形成。NuMA分布在兔GV期卵的生发泡内,在减数分裂或兔耳成纤维细胞的有丝分裂中期,集中在纺锤体的两端。在兔成纤维细胞间期核内及去核的卵母细胞胞质中都检测不到NuMA,但当两者融合并发育到类原核时期,NuMA开始在核内出现,到了中期,NuMA并不集中在纺锤体两端,而是呈点状分布在整个胞质中。结果表明NuMA在兔卵母细胞、成纤维细胞及克隆胚胎中的分布及在纺锤体端点的功能均不相同。