【摘 要】
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龙血树柴胡(Bupleurum dracaenoides Huan C. Wang, Z. R. He & H. Sun)是近年来才新发现的物种,是伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)植物。龙血树柴胡外观形态不同于柴
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龙血树柴胡(Bupleurum dracaenoides Huan C. Wang, Z. R. He & H. Sun)是近年来才新发现的物种,是伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)植物。龙血树柴胡外观形态不同于柴胡属其他植物,拥有高可达1.5米以上的木质茎,是亚洲伞形科植物中唯一的木本种类,十分特别。但其分布范围狭窄,数量极为稀少,是狭域分布的珍稀濒危物种。为了探究龙血树柴胡的濒危机制,本研究从种子萌发特性和居群遗传多样性两个方向开展了实验研究,主要结果如下：(1)龙血树柴胡成熟种子的基本性状为：黑褐色双悬果种子,千粒重约2克,种子平均长约3.89mm,宽约1.12mm,相较于同属其他物种的植物种粒整体偏大,含水量约为2%,种子具有较高的活力。就种子萌发条件而言,沙床为较理想的发芽床,发芽率可达87.67%；赤霉素和沙藏处理均能够促进种子发芽。(2)龙血树柴胡SSR-PCR较稳定优化的25μL反应体系为：Buffer 2.5μL, 25mmoL/L Mg2+2μL,2.5mmoL/L dNTPs 1μL, 10umoL/L正向反向引物各1μL,50ng*μL模板DNA 2μL,5U/μL Taq聚合酶0.2LL,双蒸水15.3μL。进行PCR反应的程序设定如下：首先,在94℃下进行3min的预变性；然后,在94℃下进行30s的变性,之后在58℃下进行30s的退火,再在72℃下进行lmin的延伸,这三个步骤共设定35个循环；最后,在72℃下进行5min的延伸,获得的PCR产物在4℃下保存。利用这个最优反应体系共筛选出5对龙血树柴胡的SSR引物。(3)利用所筛选的5对SSR引物,共检测到29个基因位点,8个居群的观测等位基因数为1.6336,有效等位基因数为1.3755,平均多态性位点百分率为63.36%,Nei多态性指数及Shannon信息指数分别为0.2182、 0.3258,遗传分化系数GST为0.1325,基因流Nm为3.2729。说明了绝大部分的居群之间基因交流频率较高,遗传漂变仅会于龙血树柴胡居群间产生较小的遗传分化。从SSR标记研究的结果来看,龙血树柴胡的遗传多样性整体上偏低,遗传变异主要来自于居群的内部,不同居群之间的遗传分化处于较低的水平。(4)进一步分析表明,86%的遗传变异发生在各居群内部。不同居群的地理距离与遗传距离不具有显著地相关关系。聚类发现,研究的龙血树柴胡样本大体上可以划分为3个大组。研究结果表明,龙血树柴胡的结实和种子萌发情况正常,并不是导致其狭域分布和濒危的原因。遗传因素(遗传多样性偏低)及人为破坏等因素可能是造成其数量较少的主要因素。在当前条件下,积极的进行本物种的就地保护及异地保存资源圃,是对龙血树柴胡遗传资源保护和利用的有效措施。
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