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摘要1: 目的：借助足细胞，观察Angll及小分子干扰RNA(siRNA)沉默TRPC6后对足细胞凋亡率和自噬的影响，以探讨其分子机制。 方法：①设计、合成实验组和对照组小分子干扰RNA(siRNA)，转染足细胞，使TRPC6基因沉默，采用流式细胞术、RT-PCR及Western Blot技术检测不同浓度siRNA转染后TRPC6基因表达，优化获得TRPC6基因沉默最佳效果的条件。②体外培养小鼠肾小球足细胞，设立对照组，Angll刺激组，TRPC6基因沉默组和3-MA组。对照组用含0.02％DMSO的RPMI1640培养液培养；Angll刺激组加入Angll（10-8M）刺激MPC5；TRPC6基因沉默组运用基因沉默技术沉默TRPC6；3-MA组加入3-MA（2mM），处理后12h，24h和48h观察细胞形态并摄相。采用流氏细胞仪检测足细胞凋亡率，RT-PCR、Western blot检测自噬相关蛋白的表达，激光共聚焦电子显微镜观察自噬相关蛋白的分布。 结果：①siRNA转染后TRPC6基因mRNA和蛋白的表达，30nM的TRPC6-siRNA转染24h后TRPC6 mRNA表达量最低。②Angll组足细胞凋亡率明显升高，沉默TRPC6使足细胞凋亡率明显降低，与对照组比较有统计学意义(P﹤0.05)。③透射电镜下Angll组示足细胞超微结构发生改变，自噬表达增加，胞质中出现独立双层膜结构，胞质成分及溶酶体等细胞器形成双层及多层膜结构的自噬体。沉默TRPC6使自噬表达下降，与Angll组比较有统计学意义（P<0.05）。④Angll组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达增加，沉默TRPC6和自噬特异性阻断剂3-MA使LC3-Ⅱ表达下降，与对照组比较有统计学意义(P﹤0.01)。⑤激光共聚焦检测Angll组LC3-Ⅱ的表达增加，沉默TRPC6使LC3-Ⅱ表达趋于稳定，与对照组比较有统计学意义(P﹤0.01)。 结论：Angll促进足细胞的凋亡，沉默TPRC6抑制凋亡；沉默TRPC6和自噬特异性抑制剂3-MA使自噬相关基因LC3-Ⅱ蛋白表达下调，达到保护自噬，发挥保护足细胞的作用。认为沉默TPRC6在Angll诱导的足细胞自噬与凋亡中发挥重要作用。 摘要2: 目的：本研究旨在观察肾脏自噬相关基因 LC3-Ⅱ在阿霉素肾病大鼠模型中不同病理时期的表达及定位分布的变化情况，研究其与肾小球足细胞病变过程的相互作用，探讨自噬在蛋白尿发生发展过程中的作用机制。 方法：阿霉素大鼠肾病模型的建立，正常30只大鼠为对照组和30只阿霉素肾病大鼠为模型组。观察各组在2、4、6、8和10周各项指标的变化：①血肌酐、血胆固醇、血浆白蛋白、24h尿蛋白定量和血尿素氮；②各时间点荧光显微镜观察肾脏自噬相关基因LC3-Ⅱ定位分布的变化；③两组大鼠进行HE、PAS、Masson染色行病理学检测。④各时间点透射电子显微镜检测肾脏自噬体的表达与变化。 结果：①模型组出现高脂血症和大量蛋白尿，肌酐(Scr)及尿素氮（BUN）水平均比对照组显著升高，有统计学差异（p<0.05）。结果显示阿霉素肾病大鼠病理表现为肾病综合征，并最终发展为肾功能衰竭。②透射电子显微镜下模型组足细胞在病变早期出现系膜细胞增生，线粒体肿胀，足突增宽及融合；晚期观察到足突消失及核固缩。③HE、PAS和Masson染色，2周时系膜增生，4周系膜细胞发生空泡变性；6周发现FSGS的形成；8周80%肾小球内见玻璃样变，肾小管萎缩。④透射电镜及免疫荧光显微镜下，正常组大鼠肾组织自噬表达量较低，模型组自噬的表达量异常，在第2周及第10周自噬的表达量一直持续增高。 结论：阿霉素肾小球硬化模型随病程进展足细胞的损伤加重，导致大量蛋白尿、高脂血症、血肌酐和尿素氮升高，最终肾病到肾衰竭。肾脏病理从系膜增生到肾小球硬化；超微结构见肾小球自噬体形成，表明自噬与肾小球足细胞损伤密切相关。自噬相关基因 LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调，说明自噬与肾组织的损伤及蛋白尿的发生有密切的关系。