骨肉瘤患者血清中特异性miRNA表达谱的筛选及其临床意义的研究

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目的:本课题的目的是检测骨肉瘤病人血清中可能存在的特异性的miRNA表达谱,同时检测目标miRNA在骨肉瘤治疗过程中对于化疗和手术的敏感性。  方法:我们用低密度芯片技术分别对四组混合血清样本(骨肉瘤首次入院患者组5ml,手术前化疗组5ml,手术患者组5ml和正常对照组5ml)的全部miRNA进行了初筛,然后我们利用Taqman探针的RT-qPCR技术,对骨肉瘤首院组相对于对照组变化显著的miRNA进行验证,检测目标miRNA在骨肉瘤患者血清中的表达变化。同时我们选取其中的5种miRNA,检测它们在骨肉瘤治疗过程中对于化疗和手术治疗的敏感性。  结果:芯片结果显示,OS血清中存在多种miRNA,从OS首院组中筛选出32种变化显著的miRNA,通过RT-qPCR复筛验证,我们发现了3种miRNA(miR-199a,miR-328和miR-32)在OS患者血清中的表达变化明显。在检测miRNA在骨肉瘤治疗过程中对于化疗和手术治疗的敏感性时,我们发现miR-199a和miRNA-32对化疗抵抗但对手术敏感。  结论: miR-199a,miR-32和miR-328三种miRNA在骨肉瘤患者血清中的表达变化明显,提示这3种miRNA可能作为一种潜在的OS早期诊断标志物。miR-199a和miR-32表现出对手术敏感,可能与OS患者预后有关。同时我们根据miR-199a在OS患者血清和组织中都有明显变化,且能够影响骨肉瘤细胞系MG63的生物学功能,我们得出miR-199a是一种在骨肉瘤发生和治疗过程中极其重要的miRNA。
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