【摘 要】
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目的:通过构建高效表达载体pGEX-NT3的重组质粒并在JM109宿主菌中进行表达,希望获得具有生物活性的人NT3蛋白,为大量获得重组人NT3纯品打下一定的实验基础.方法:首先通过正常
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目的:通过构建高效表达载体pGEX-NT3的重组质粒并在JM109宿主菌中进行表达,希望获得具有生物活性的人NT3蛋白,为大量获得重组人NT3纯品打下一定的实验基础.方法:首先通过正常人骨髓获得全基因组DNA,经PCR扩增出NT3全序列;再经双酶切连接到表达载体pGEX-1λT中,构建重组载体pGEX-NT3并转化宿主菌JM109.通过酶切和自动化测序鉴定重组质粒的正确性.最后经IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳检测NT3融和蛋白的表达.结果:通过PCR扩增出NT3外显子730bpDNA片断;重组质粒经双酶切检测到与PCR相同大小的DNA片断;经自动化测序除第198位碱基发生突变,其它序列与文献报道完全一致.而含重组质粒的宿主菌JM109经IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳,显示有54kD的特异性融合蛋白条带产生,并发现菌体裂解液沉淀部分NT3融合蛋白含量较高.结论:成功构建了人NT3原核重组表达载体pGEX-NT3,表达出人NT3融合蛋白,为获得具有生物活性的人NT3纯化蛋白打下了实验基础.
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