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目的:本文在CH50溶血法的基础上,以人红细胞替代绵羊红细胞,将多管法转化为单管法,创建一种操作简单,稳定可靠的检测血浆补体总活性的新方法。同时本文应用该法检测ICU患者,冠心病患者,健康体检者的血浆补体总活性,并在分子水平上研究了冠心病患者补体活性与MICA*008基因携带的关系。方法:1.首先以绵羊红细胞替代人红细胞,兔抗人红细胞抗体替代兔抗羊红细胞抗体(溶血素)进行溶血试验,证明不同红细胞浓度和血浆浓度对红细胞破坏后释放血红蛋白效能的影响。并通过CH50多管法溶血试验确定发生溶血反应的各种试剂的最适浓度,创建单管溶血比色法。同时通过线性研究和重复试验验证了该法的准确度和稳定性。2.使用CH50标准法检测血浆和血清中的补体活性,并使用单管溶血比色法检测以不同人红细胞作为溶血指示系统的同一份血浆中的补体活性,进一步验证单管溶血比色法的可行性。3.使用CH50法和单管溶血比色法检测同一份血浆的补体活性,验证两种方法的相关性。4.使用单管溶血比色试验检测ICU患者,冠心病患者和健康体检者的补体总活性,证明该方法有一定的临床应用价值。同时采用PCR技术检测冠心病患者和健康者的MICA*008基因携带情况,分析冠心病患者补体活性与MICA*008基因的关系。结果:1.本文应用人红细胞和兔抗人红细胞抗体替代绵羊红细胞和溶血素进行溶血试验,结果发现不同浓度的红细胞对溶血程度的影响低于不同浓度的血浆对溶血程度的影响,同时,本文得出当血浆浓度为20%时,红细胞浓度的不同对红细胞破坏后释放血红蛋白的效能影响最低。因此本文将20%红细胞悬液所对应第九管(20%血浆浓度)中各成分的含量,作为单管溶血比色法中各成分比例的参考。本文应用单管溶血比色法检测不同浓度血浆的补体活性,并连续5天测定同一份血浆的补体活性,结果证明不同浓度血浆的补体总活性呈线性分布,连续5天所测定的补体活性值的变异系数CV=11.3%,说明单管溶血比色试验具有一定的准确性和稳定性。2.通过CH50标准法检测血浆和血清中的补体活性,本文得出血浆和血清中的补体活性完全相同,因此可以使用血浆替代血清标本进行补体活性测定,补体检测技术得到了优化。同时,通过不同人红细胞作为溶血指示系统检测同一份血浆中的补体活性,本文得出血浆中的补体活性大致相同(P>0.05),说明不同红细胞不会影响血浆中的补体含量,单管溶血法具有可行性。3.该方法中测定的溶血OD值与CH50溶血法所测的补体活性值两者呈线性相关,说明单管溶血比色法与CH50法具有显著的相关关系,单管溶血比色法可以替代CH50溶血法检测补体总活性。4.ICU患者和冠心病患者的补体活性要显著低于健康体检者的补体活性,单管溶血比色法有一定的临床应用价值。冠心病患者和健康体检者的MICA*008基因分布大致相同,同时冠心病患者的补体水平与MICA*008的携带没有显著关联。结论:1.单管溶血法检测补体活性具有良好的准确性,稳定性和可行性,并且与CH50法具有显著的相关关系,该法进一步优化CH50溶血试验,具有一定的临床应用价值。2.ICU患者和冠心病患者的补体活性较低,说明ICU患者的机体免疫功能紊乱,冠心病患者机体或许处于炎症反应阶段。3.冠心病患者的补体水平与MICA*008基因没有显著关联。