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背景和目的 浸润和转移可发生在肝癌的各个阶段,是治疗肿瘤失败的常见因素,也是肿瘤病人死亡的主要原因之一。大量研究证实,肝癌的浸润和转移与肝癌的肿瘤微环境密切相关,而各种免疫因子、炎症因子在肿瘤的浸润和迁移的过程中起重要作用,是肿瘤微环境的重要组成部分。趋化因子配体CCL18(chemokineCC-motifligand18,CCL18)属CC族趋化因子,主要由巨噬细胞和树突细胞(DC)分泌,是新近发现的炎性趋化因子,在正常人血清中可测得,有研究表明,该因子与胃癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤的浸润和转移过程密切相关。但有关CCL18在肝癌中的表达及意义的研究在国内外尚未见文献报道,与肝癌的生物学关系尚不明确。本研究通过测定CCL18和它的功能性受体PITPNM3在人肝癌细胞株SMMC-7721中的表达情况,进一步探索CCL18通过其受体在人肝癌细胞株SMMC-7721黏附、迁移和浸润过程中所起的作用。 材料与方法 1.细胞培养:人肝癌细胞株SMMC-7721(细胞购自上海细胞库)、乳腺癌细胞株MDA-MB-231(细胞购自ATCC)均在完全培养基中培养(含10％胎牛血清的DMEM),人正常肝细胞株HL-7702(细胞购自上海细胞库)在完全培养基中培养(含20%胎牛血清的DMEM)。 2.用重组CCL18(50ng/ml)诱导人肝癌细胞株SMMC-77215天后,再将SMMC-7721细胞分成4组,各组分别用不同浓度的CCL18(0、10、20、50ng/ml)处理1小时,检测其促进细胞的体外黏附能力。 3.用重组CCL18(50ng/ml)诱导人肝癌细胞株SMMC-772110天后,将SMMC-7721细胞株分成4组,各组分别用不同浓度的CCL18(0、10、20、50ng/ml),用Transwell和划痕实验检测细胞的体外迁移和浸润能力。 4.用westernblot方法检测趋化因子配体CCL18的功能性受体PITPNM3在肝癌细胞株SMMC-7721的表达。分为三组:人正常肝细胞株HL-7702(阴性对照)、乳腺癌细胞株MDA-MB-231(阳性对照)、肝癌细胞株SMMC-7721(实验组)。采用免疫荧光法证明CCL18和PITPNM3是否共定位于SMMC-7721细胞的胞膜上。 5.用重组CCL18(50ng/ml)诱导人肝癌细胞株SMMC-772110天,再用小分子干扰RNA(siRNA)沉默受体PITPNM3,分为6组(PBS、Un、Monk、GFP-Si、PITPNM3-Si1、PITPNM3-Si2),观察SMMC-7721细胞被沉默了受体PITPNM3后的体外浸润能力。 研究结果 1.重组CCL18诱导肝癌SMMC-7721细胞5天后,发现SMMC-7721细胞的粘附力明显增加,并具有剂量依赖性,差异性比较具有统计学意义(P
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