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目的:齐墩果酸(Oleanic acid,OA)溶解度差,生物利用度低,大大影响其疗效。本课题为研究一种新合成OA衍生物,SZC014,体外抗乳腺癌作用及其潜在的分子机制。 方法:本实验研究采用:(1) MTT法检测不同浓度SZC014对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞以及人正常乳腺上皮细胞MCF-10A细胞增殖活性的影响;(2)通过细胞迁移实验和细胞集落形成实验,研究SZC014对人乳腺癌细胞MCF-7生物学功能的抑制作用;(3)光镜和电子透射显微镜分别观察SZC014对MCF-7细胞形态变化以及自噬的影响;(4)流式AV-PI双染法检测SZC014对MCF-7细胞凋亡百分率的影响;(5)流式DCFH-DA荧光染色检测SZC014处理后MCF-7细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的变化;(6)采用Westernblot方法检测经SZC014处理后,细胞相关功能蛋白质水平的变化。 结果:(1)与空白对照组相比,SZC014能够显著抑制人乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)的增殖活性(P＜0.05),并呈现时间剂量依赖性,而对人乳腺上皮细胞(MCF-10A)抑制作用较弱(P＞0.05),表明SZC014对乳腺癌细胞增殖具有选择性抑制作用。(2)与空白对照组相比,SZC014能显著降低MCF-7细胞的迁移距离和细胞集落数目,且呈现剂量依赖性,表明SZC014能够抑制MCF-7细胞迁移远处能力和克隆形成能力。(3)与空白对照组相比,SZC014处理MCF-7细胞可以明显提高凋亡细胞百分比和Bax/Bcl-2蛋白比值,降低caspase-3、caspase-9蛋白表达,进一步表明SZC014能够诱导MCF-7细胞发生凋亡。(4)与空白对照组相比,SZC014处理MCF-7细胞后,通过电子透射显微镜可以看到MCF-7细胞胞浆中明显的自噬小体生成,并且LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转变明显增多,表明SZC014能诱导MCF-7细胞发生自噬。(5)与空白对照组相比,SZC014处理后,MCF-7细胞中ROS的生成量明显增多,表明SZC014能促进细胞ROS生成。(6)与空白对照组相比,SZC014处理后,MCF-7细胞中Akt和p-Akt、p65和p-p65的蛋白水平均明显下降,表明SZC014可通过调节Akt/NF-κB信号通路发挥抗肿瘤的作用。 结论:本研究揭示了SZC014通过Akt/NF-κB信号通路刺激ROS大量生成,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡和自噬,从而抑制细胞增殖与迁移,本研究表明,SZC014具有设计开发为治疗乳腺癌新药物的潜在应用价值。