灵芝多糖和三萜提取物体外免疫学评价

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目的:本课题以灵芝多糖和灵芝三萜提取物为研究对象,评价这两种有效组分对NK-92MI细胞和Jurkat细胞增殖、凋亡作用的影响,为益元康方中有效组分的进一步筛选奠定基础。方法:(1)按照筛选出的最佳工艺提取纯化灵芝多糖和灵芝三萜提取物,配制不同浓度的灵芝多糖与灵芝三萜提取物样品溶液,并测定其纯度。(2)NK-92MI细胞和Jurkat细胞生长曲线的测定方法采用四唑盐比色法(MTT法),筛选出有利于NK-92MI细胞和Jurkat细胞生长的种板浓度。(3)灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用采用MTT法,研究不同浓度的灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用影响。(4)灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的凋亡作用采用Annexin V-FITC/PI双染法,利用流式细胞仪检测并用F low Jo软件进行分析,考察不同浓度的灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92M1细胞和Jurkat细胞凋亡的影响。结果:(1)灵芝多糖提取物的纯度为44.31%,灵芝三萜提取物纯度为40.44%。(2) NK-92MI细胞接种浓度为4×105~8×1 05/ml,Jurkat细胞接种浓度为2×105-4×105/ml时,比较有利于细胞的生长。(3)灵芝多糖提取物浓度为300μg/ml,对NK-92MI细胞作用12h时,NK-92MI细胞的增殖率最大,为20.594%,此条件下灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞的增殖促进作用较好;浓度为400μg/ml,对Jurkat细胞作用24h时,Jurkat细胞的增殖率最大,为8.658%,此条件下灵芝多糖提取物对Jurkat细胞的增殖促进作用较好。灵芝三萜提取物浓度为1μg/ml,对NK-92MI细胞作用24h时,对Jurkat细胞作用1 2h时,细胞的增殖率最大,增殖率分别为24.023%和7.430%,此条件下灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖促进作用较好。(4)灵芝多糖提取物浓度为3001μg/ml,作用时间为12h时,对NK-92MI细胞的凋亡抑制率最大,为30.75%,故认为此条件下灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞的凋亡抑制作用较好:浓度为400μg/ml,作用时间为12h时,对Jurkat细胞的凋亡抑制率最大,为13.01%,此条件下灵芝多糖提取物对Jurkat细胞的凋亡抑制作用较好。灵芝三萜提取物浓度为1μg/ml,作用时间为12h时,对NK-92MI细胞的凋亡率抑制率最大为53.36%,故认为此条件下灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞的凋亡抑制作用较好;浓度为1μg/ml,作用时间为48h时,对Jurkat细胞的凋亡率抑制率最大,为18.45%,此条件下灵芝三萜提取物对Jurkat细胞的凋亡抑制作用较好。结论:(1)灵芝多糖和灵芝三萜提取物在一定浓度范围内能够促进NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用。(2)灵芝多糖和三萜提取物在一定浓度范围内对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的凋亡具有一定的抑制作用。
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