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组织芯片(Tissue Microarray TMA)属于一种生物芯片,是近年来发展起来的高通量、多样本的分析工具。组织芯片在肿瘤领域应用越来越广泛,收集数十或成百上千例肿瘤组织和正常组织,按预先设计的顺序排列,与RT-PCR、原位杂交及免疫组化等技术相结合,在基因转录和相关表达产物生物学功能水平上进行研究,阐明基因在肿瘤临床诊断、治疗和预后预测中的作用。结直肠癌(Colorectal Cancer CRC)是常见恶性肿瘤,侵袭和转移是导致结直肠癌患者死亡的主要原因。大量研究表明WNT信号转导途径的异常激活与人类结直肠癌发生有关。β-catenin是经典WNT通路的关键作用分子,它与LEF/TCF转录因子形成复合物向核内转位,激活其下游靶基因的转录与表达,如cyclinD1,c-myc,c-jun等。虽然这些事件过程还不是很清楚,但癌蛋白的过表达可直接促进肿瘤的发生。NGX6基因(Nasopharyngeal carcinoma related protein gene)是中南大学肿瘤研究所分子遗传室采用定位侯选克隆策略克隆的一个鼻咽癌侯选抑瘤基因。前期关于NGX6基因的实验工作发现:NGX6基因在结肠癌中存在不同程度的表达下调,伴有淋巴结转移的结肠癌样本中NGX6表达下调的比例(15/16)远高于无淋巴结转移的结肠癌样本(25/34,P＜0.05),NGX6在结肠癌细胞系HT-29中的重表达可抑制了裸鼠体内结肠癌细胞系HT-29的肝转移,可以使表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化水平下降,通过Ras/Raf/MAPK途径负调控EGFR增殖信号通路。这些功能研究结果提示NGX6可能在肿瘤的发生、发展中发挥一定作用,NGX6可能与肿瘤的侵袭转移相关。本文在336个点阵的结直肠组织芯片上,利用免疫组化检测β-catenin、TCF-4、cyclinD1、c-myc和c-jun蛋白表达,并利用原位杂交检测NGX6 mRNA的表达。本研究主要结果如下:1.结直肠癌、癌旁粘膜和癌旁正常粘膜阳性表达比较:β-catenin、TCF-4、cyclinD1、c-myc、c-jun和NGX6 mRNA各检测指标阳性表达存在明显差异。2.阳性表达与临床病理参数的关系:β-catenin阳性表达在结直肠癌组织中与Dukes分期有关;cyclinD1蛋白阳性表达在结直肠癌组织中与病理分化程度有关;c-jun蛋白表达在结直肠癌部位有关;NGX6 mRNA阳性表达在结直肠癌组织中与Dukes分期、肿块大小和淋巴结转移有关;TCF4蛋白和c-jun蛋白阳性表达与患者的年龄、性别、分化程度、临床分期、淋巴结转移和远处转移等无关。3.不同检测指标在结直肠癌组织中表达的相关性:β-catenin、TCF-4、cyclinD1、c-myc、c-jun和NGX6 mRNA阳性表达之间存在相关性。4.原发性肿瘤与淋巴结转移癌比较:TCF4、c-myc、c-jun阳性表达在原发性肿瘤组织和淋巴结转移癌组织中比较有显著性差异;而β-catenin、cyclinD1、c-myc、NGX6阳性表达在原发性肿瘤组织和淋巴结转移癌组织中比较无差异。根据上述结果,本文得出结论,WNT信号转导途径中的蛋白表达异常与人类结直肠癌发生、发展和转移有关。NGX6基因作为抑癌基因,能够和WNT信号转导途径的部分蛋白发生交互作用。