肉苁蓉水煎液改善顺铂所致卵巢早衰的实验研究

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目的:随着育龄期女性的癌症检出率及化疗后生存率的提高,化疗引起的卵巢损害也不断受到重视。由于化疗不仅对女性生殖及内分泌功能影响较大,还会使他们的生活质量下降。因此,绝经前女性化疗所致的卵巢早衰(premature ovarianfailure,POF)不断受到重视。目前针对化疗致卵巢损害保护的措施主要有促性腺激素释放激素激动剂及拮抗剂、口服避孕药、胚胎、卵子及卵巢组织冻存、卵巢干细胞移植、抗氧化应激及细胞凋亡及中医中药治疗等,但这些防治措施仍处研究中,还未证实它在临床使用中是足够安全有效的,所以需要对这一领域进一步深入研究。与西医相比,中医对疾病的治疗多从机体的整体出发进行调节,多数研究提到中医中药对围绝经期卵巢功能失调及POF的治疗有效,由于中药方剂成分较多,它是怎样对卵巢发挥保护的机制仍不清。根据对肉苁蓉研究的文献记载,中药肉苁蓉(Cistanches Herba,CH)是一种富含植物雌激素作用的中药,具有补肾养血,填精补髓等功效,用于阳痿及不孕等治疗[1]。然而,肉苁蓉是否具有保护化疗所致的POF仍然不清。本实验目的主要是研究中药肉苁蓉水煎液对顺铂所致卵巢早衰的保护作用。  方法:40只昆明雌性小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、顺铂+低剂量肉苁蓉组及顺铂+高剂量肉苁蓉组。顺铂组、顺铂+低剂量及高剂量肉苁蓉干预组,分别给予腹腔注射顺铂(前3天给予3.0 mg/kg·d,后4天给予2.0 mg/kg·d),同时给予等体积生理盐水及不同浓度肉苁蓉水煎液(5 g/kg.d、10 g/kg.d)灌胃处理。干预1周后,停止腹腔注射顺铂,肉苁蓉水煎液继续灌胃1周。对照组小鼠给予同等剂量的生理盐水腹腔注射及灌胃处理2周。实验结束后,各组小鼠称重、卵巢称重、ELISA检测血中促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌激素(estradiol,E2)水平及HE染色观察卵巢形态结构来评估卵巢功能,通过TUNEL染色检测卵巢细胞凋亡情况并计算其凋亡率、Western blot方法检测卵巢组织中凋亡相关蛋白(Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、Bcl-2、Bax)的表达水平。  结果:4组小鼠进行比较,顺铂组可以观察到小鼠体重及卵巢重量下降,血FSH水平升高、血E2水平下降;卵巢HE染色可见卵泡数量及成熟卵泡明显减少,TUNEL染色见卵泡内颗粒细胞大量凋亡;Cleaved-caspase3及Cleaved-PARP的表达水平升高,Bcl-2/Bax表达水平下调,然而,肉苁蓉中药干预组在一定程度上能逆转卵巢功能及结构损害(如FSH水平下降,E2水平升高及抑制卵泡数量减少),并使卵巢凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3及Cleaved-PARP表达下调、Bcl-2/Bax比值上调来对顺铂所致卵巢损害的保护,尤以高剂量组明显。  结论:本实验发现肉苁蓉水煎液对顺铂所致POF具有保护作用,主要是通过降低促凋亡蛋白的表达,并使抗凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达上调来抑制卵巢细胞凋亡,从而改善顺铂所致的卵巢功能损害。
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