【摘 要】
：
该研究构建了海带表达r-PA的质粒pSVrPA/C-B,采用基因枪法将带有r-PA基因的质粒导入海带雌配子体,经过鉴定得到有溶栓活性的海带孢子体,初步建立了海带表达r-PA或其它生物药
论文部分内容阅读
该研究构建了海带表达r-PA的质粒pSVrPA/C-B,采用基因枪法将带有r-PA基因的质粒导入海带雌配子体,经过鉴定得到有溶栓活性的海带孢子体,初步建立了海带表达r-PA或其它生物药物的技术平台.大肠杆菌表达系统具有生长周期短,表达量高的优点,用于表达r-PA的主要难点在于分离纯化和复性工艺,因此该文还同时对寻找新的大肠杆菌表达r-PA的纯化复性工艺进行了初步的探索,首次将复性色谱用于r-PA的体外复性.该研究包括了两部分工作,第一部分是关于r-PA在海带中表达的研究.这部分研究主要包括了以下工作:1.通过PCR、酶切、连接、转化等分子生物学方法构建了能够在海带中表达r-PA的质粒pSVrPA/C-B,其特征是采用两个不同的启动子分别启动筛选标记基因和目的基因,bar基因作为筛选标记基因,位于CaMV 35S启动子下游,r-PA基因插入到SV40启动子下游;r-PA基因两端包含多克隆酶切位点(MCS),可以方便的插入其他外源基因,为进一步研究奠定基础.2.用PCR、Southern Blotting和纤维平板法鉴定转r-PA基因海带孢子体.在五批38株海带孢子体中,活性检出率平均达到40﹪,PCR及PCR Southern Blotting检测阳性一株,基因组Southern Blotting检测则无阳性结果.第二部分是关于r-PA在大肠杆菌中融合表达以及纯化复性的初步探索,这部分研究主要包括如下工作:1.构建了r-PA大肠杆菌融合表达的质粒pET32-rPA,r-PA基因位于组氨酸标签(His<,6>·Tag)下游.转化大肠杆菌BL21(DE3),用乳糖进行诱导表达,融合蛋白以包涵体形式存在,表达量达到40﹪.2.对r-PA融合蛋白的诱导表达条件进行了摸索.发现乳糖和IPTG诱导效果相当,综合考虑生产成本,选用乳糖为诱导剂.对诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、氨苄浓度做正交试验,选择诱导温度35℃,乳糖浓度10mM,诱导时间4h,氨苄浓度30μg/ml为诱导表达条件.3.采用金属螯合色谱(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)柱上复性方法对r-PA融合蛋白进行了初步纯化和体外复性.经过一步纯化,融合蛋白纯度达到80﹪.Western结果表明融合蛋白能和t-PA(C-16)羊多抗特异性结合.
其他文献
目的 分析集束化护理措施应用在呼吸机相关肺炎护理中的临床效果.方法 随机将我院收治的实施呼吸机治疗的患者91例分成两组,给予A组45例患者实施基础性护理,给予B组46例患者
沟通是科技期刊编辑的重要工作之一.将“非暴力沟通”应用在编辑与作者的沟通中,通过不带评论的观察、诚实表达自己的感受并体察对方的感受、提出需要并倾听对方的需要,以及
他不仅仅给了她光明，更给予她勇气，让她在世间即使跌跌撞撞也不至于颓丧失望。他是她颠沛流离生活里最坚定的勇气，颠扑不破。 1 2013年冬季，甄娴曾回去过柏林，回去那个曾经的小书店 ，无奈被追随者认出。甄娴还未来得及离去便被赶来的记者围得水泄不通，有人问她为何这些年一直独身一人。 她微笑答道：“我只是在等待。” 人们恍然大悟，以为甄娴是在等待命中注定的那个人，他们不知道，她等的是给过她永恒的
进入二十一世纪以来,持续干旱和水资源缺乏成为人类面临的新危机,这个危机在我国尤为严重。我国的淡水储量在世界排名第四,但人均占有量却仅为世界平均水平的四分之一,而且水
1娇扬姐，陈彻喜欢喝什么饮料？什么电影最让他着迷？若是旅行，他更爱山水还是沙漠？蜜蜜扑闪着一双眼，纤手破新橙，一面仰着光洁的脸庞向娇扬打听。娇扬笑道，纯净水，动作片，若是旅行，只要身
背景与目的：恶性肿瘤已成为威胁人类健康的第一杀手，且在全球范围内的发病率及死亡率呈逐年上升趋势。化疗仍然是目前恶性肿瘤治疗的主要手段之一。由于肿瘤组织具有异质性，不同
目的:分析研究老年肺结核的预防与控制效果分析.方法:取我院2015年3月—2019年8月收治的老年肺结核患者50例作为研究对象,比较这50例老年肺结核患者在进行预防控制前后的并发
戴上了是一生一世，可不后悔？“你想好了？”“想好了。”“戴上了是一生一世，可不后悔？”“姥姥。”白衣女子对着座上老者唤了一声，俯身深深伏下，坚定的声音撞击在冰冷的云石地面上：“
革命历史题材创作,对建设社会主义精神文明,向人民进行革命传统教育,特别是对青少年进行共产主义理想和爱国主义教育,有着重要的意义。中央领导同志关于学习宣传党史和革命
自以为是的爱情终究是抵不过所谓的背叛，而曾经相依相靠的亲情也终究抵不过报仇雪恨的决心。 1. 辛统五十四年，嘉麟国国主突染恶疾去世，举国哀悼。正是旧主甍新主登基的混乱时期，闫宇国太子发兵嘉麟直取十城方才退兵，这退兵不仅使得嘉麟国割了两座城池，还应允了飘絮公主到闫宇国为质。 嘉麟忍辱。 天下哗然。 世人虽不知天下谁人最富，天下谁人最美，天下谁人当权，但没有人不知嘉麟的飘絮公主，她从一出生就