论文部分内容阅读
高尿酸血症是困扰人类的众多代谢疾病之一。大量的国内外研究显示,高尿酸血与许多疾病密切相关,如急性痛风性关节炎、尿酸性肾病、高血压、肥胖、糖尿病和心血管疾病等。伴随着我国经济水平的高速列车,人民的生活习惯,饮食规律发生了翻天覆地的变化。夜宵、快餐文化、啤酒、饮料(含果糖)等在我国的大肆泛滥,致使我国的高尿酸血症患者爆发式的增长,并呈现低龄化的趋势。严重影响着我国人民的身体健康以及生活质量。目前高尿酸血症的研究尚缺乏公认的合理的动物模型和安全有效的治疗药物,故本次实验我们希望尝试建立一种血尿酸值较为平缓、稳定、持久、对肾脏损害小的大鼠高尿酸血症模型,并在此基础上探究虎桂药对的组分——虎杖苷和桂皮醛相互配伍对高尿酸血症的治疗作用以及其作用机制。1.大鼠高尿酸血症模型实验目的:优化次黄嘌呤,氧嗪酸钾,乙胺丁醇三种药物联合制备大鼠高尿酸血症模型的使用剂量,以期得到更合适的大鼠高尿酸血症模型。方法:雄性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只。模型Ⅰ组:给以灌胃75mg/kg次黄嘌呤和250mg/kg盐酸乙胺丁醇,皮下注射200mg/kg氧嗪酸钾(1次/d)。模型Ⅱ组:给以灌胃75mg/kg次黄嘌呤和250mg/kg盐酸乙胺丁醇(1次/d),皮下注射100mg/kg氧嗪酸钾(1次/12h)。模型Ⅲ组:给以灌胃50mg/kg次黄嘌呤和250mg/kg盐酸乙胺丁醇,皮下注射200mg/kg氧嗪酸钾(1次/d)。空白组给予生理盐水灌胃及橄榄油皮下注射。连续造模24天。第4,11,18d皮下注射后6h,大鼠眼眶取血,测SUA含量。第24天皮下注射后,分别3、6、12、24h取血测SUA含量,并测6h血清中BUN、Cr的含量。大鼠处死取肾,测察其病理改变。结果:与空白组对比,三组造模方式均能引起大鼠的血尿酸含量明显上升(P<0.01),可维持12h,尤其是模型Ⅱ组能达到24h;三组造模方式的大鼠肾脏病理切片表明,三种造模方式均能引起肾脏轻微损伤;模型Ⅰ组和模型Ⅱ组的血尿素氮含量与空白组对比明显的升高(P<0.01,P<0.05)。结论:三种造模方式均能成功制备大鼠高尿酸血症模型,并伴有轻微的肾脏器质和功能损伤(尤其是模型Ⅲ组损伤最轻),具有血尿酸值增长维持时间长的优点(尤其是模型Ⅱ组可持续24h)。2.虎桂药对组分配伍对高尿酸血症的治疗及机制的探究目的:探究虎桂药对的组分——虎杖苷(Polydatin)和桂皮醛(Cinnamaldehyde)互相配伍后,对大鼠高尿酸血症的降尿酸作用,并从尿酸的排泄和生成两个途径,初步探索其多靶点降尿酸的机理,为中医药治疗高尿酸血症提供新的思路和方法。方法:雄性SD大鼠70只随机分为7组。空白组、模型组、别嘌呤醇组、苯溴马隆组、虎杖苷和桂皮醛(PC)的低、中、高组,每组10只。皮下注射氧嗪酸钾(200mg/kg),7h后灌胃乙胺丁醇(250mg/kg)和次黄嘌呤(50mg/kg)制备高尿酸血症大鼠模型,连续26天(1次/d)。第4天,皮下注射后6h眼眶取血测大鼠的SUA值。第5天起,皮下注射前1h,灌胃治疗药,持续21天(1次/d)。第25天将大鼠放进代谢笼,收集尿液24h,备用。最后一天皮下注射6h后,大鼠腹主动脉取血,测定SUA、Cr、BUN和GPT的含量;取出大鼠肝,肾,小肠备用。ELISA试剂盒测定尿液中Kim-1、NGAL的含量;肾脏组织的病理学观察,统计评分;qPCR测定肝脏XOD、ADA和肾脏GLUT9、URAT1、OAT1、OCT1的基因表达;Western Blotting测定肝脏XOD和肾脏GLUT9、URAT1的蛋白表达;免疫组化测定小肠MRP4的蛋白表达,分析照片阳性的累积光密度值(IOD)。结果:造模后,大鼠SUA含量明显升高(P<0.01)。给予治疗药后,PC中、高组SUA含量明显下降(P<0.01,P<0.05);PC中组BUN含量明显下降(P<0.05);PC三组的NGAL含量明显下降(P<0.01,P<0.05);PC中、高组的Kim-1含量明显下降(P<0.01);PC三组肝脏ADA,XOD mRNA表达明显下降,肾脏GLUT9,URAT1mRNA表达明显下降,OAT1、OCT1 mRNA表达明显上升(P<0.01,P<0.05);PC三组肝脏XOD蛋白表达明显下降,肾脏GLUT9、URAT1蛋白表达明显下降(P<0.01,P<0.05);PC中组小肠MRP4蛋白表达明显升高(P<0.01);肾脏组织病理切片表明:PC中组的大多数肾皮质肾小管上皮细胞形态正常,胞浆丰富,肾髓质少数集合管管腔内见红细胞堆积。结论:虎桂药对成分——虎杖苷和桂皮醛相互配伍后,具有明显的抗高尿酸血症的药理作用。可通过抑制尿酸的生成和促进尿酸的排泄双重降低血尿酸含量,改善高尿酸血症对肾脏造成的器质及功能性损伤。其作用机制可能与抑制大鼠肝脏XOD、ADA和肾脏URAT1、GLUT9的表达;促进肾脏OCT1、OAT1和小肠MRP4的表达相关。