【摘 要】
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目的 通过比较经细胞因子诱导的外周血来源的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者树突状细胞(DC)和正常人DC在免疫分子表达和免疫功能等方面的差别,探讨ITP患者外周血中DC所处的
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目的 通过比较经细胞因子诱导的外周血来源的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者树突状细胞(DC)和正常人DC在免疫分子表达和免疫功能等方面的差别,探讨ITP患者外周血中DC所处的功能状态,并通过其推测DC在ITP发病机制中的作用。 方法 临床确诊ITP的患者38例,从ITP患者体内采集15ml外周血,以淋巴细胞分离液分离并离心获得界面细胞,贴壁培养2h,获得单个核细胞,加入细胞因子,即rh GM-CSF(100ng/ml)和rh IL-4(500U/ml),以及LPS(50U/ml),在体外培养扩增6天,在光镜下观察其生长情况。培养6天后,以扫描显微镜和透射显微镜观察细胞形态;以FITC标记的CD80和PE标记的CD86单抗标记DC,用流式细胞仪检测DC表型CD80、CD86的表达水平;以MTT法检测ITP患者DC刺激异体T淋巴细胞增殖能力;以IL-12ELISA试剂盒测定DC分泌IL-12等方法进行研究。以健康成人23例作为对照。 结果 第5天体外培养的DC由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞,随着培养时间的延长,加入LPS第6天后,此类细胞数量增多,为形态不规则的毛刺状,为典型树突状细胞形态。流式细胞仪检测表明,ITP患者的成熟DC高水平地表达CD80和CD86分子。MTT法检测ITP患者DC和正常人DC刺激异体T淋巴细胞增殖能力,ITP患者刺激同种异体淋巴细胞增殖能力明显强于正常对照组。以ELISA试剂盒测定培养的第6天DC分泌的上清液,发现特发性血小板减少性紫癜患者DC分泌的IL-12水平高于正常人。 结论 ①人外周血经rh GM-CSF+rh IL-4+LPS体外诱导培养,能诱导出成熟的DC②ITP患者外周血中培养的DC较正常人更倾向于成熟状态③ITP患者外周血单核细胞向DC分化的能力增强,分化而成的DC相对于正常人具有较强的抗原呈递能力。
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