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铬是人体必需的微量营养元素之一,是人体内葡萄糖耐量因子(glucosetolerancefactor,GTF)的重要组成成分。人体缺铬会产生葡萄糖、脂肪、蛋白质代谢障碍,引起各种疾病,如动脉粥样硬化、糖尿病、冠心病、末梢神经炎、近视眼等;动物缺铬则表现为胆固醇或血糖升高、生长迟缓、免疫力下降、繁殖能力下降和寿命缩短等,补铬后,症状消失(AndersonRA,1997)。由于不同形式的铬在组织中的结合程度不同,导致吸收率不同。无机铬不但毒性大,且吸收水平极低,约为0.14%-3.0%;有机铬吸收迅速且安全,吸收率可达10%-25%.
在有机铬制剂中,富铬酵母具有生物活性高、毒性小、生产成本低等优点,尤其是作为预防和治疗糖尿病药物的重要功效成分已引起人们极大重视。同时,酵母本身的生物活性物质对生物体也有保健作用。普通酿酒酵母富集铬的能力非常有限,本实验旨在通过原生质体复合诱变选育富铬能力远高于普通酿酒酵母的新型诱变菌株,以应用于生产。
以酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)SY8二倍体为出发菌株,通过单倍体分离,液体抗性水平检测,获得了酿酒酵母单倍体抗性菌株SY8-6(Cr3+抗性5mmol/L)。以蜗牛酶酶解SY8-6菌株制备其原生质体,原生质体形成优化条件为:0.8mol/LNaCl,1.5%蜗牛酶,酶解45min,0.3%β-巯基乙醇。
对SY8-6菌株的原生质体进行紫外线诱变,紫外灯功率为30W,工作距离30cm,最佳照射时间为50s。通过液体抗性水平检测获得了1株诱变菌株SY8-6-4(Cr3+抗性10mmol/L),其拮抗CrCl3浓度为出发菌株的2倍。
将SY8-6-4菌株再次进行原生质体微波复合诱变,微波源为2450MHz,功率为850W,最佳照射时间为80s。通过液体抗性水平检测获得了1株复合诱变菌株SY8-6-4-29(Cr3+抗性20mmol/L),其拮抗CrCl3浓度是出发菌株的4倍。在非重金属选择压力下,50世代的遗传稳定性检测表明,诱变菌株SY8-6-4与SY8-6-4-29的遗传稳定性均保持在90%以上。
生物学功能检测结果表明,诱变菌株SY8-6-4和SY8-6-4-29拮抗紫外线(UV)、拮抗60Co辐射能力均明显高于出发菌株SY8-6;它们清除羟基自由基的能力分别是出发菌株的2.71倍和4.78倍。