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目的 通过体外培养人肺泡上皮细胞 A549，用 TGF-β1刺激其发生上皮-间质转化，运用现代分子生物学和超微病理学实验技术，探讨丹参酮在防治肺间质纤维化上皮间质转化中的干预作用及机制，为进一步研究Ta nⅡA提供理论与实验依据。 方法 将正常培养的人肺泡上皮细胞 A549分5组：空白对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β1终浓度为5ng/ml，诱导24h）、丹参酮ⅡA低、中、高3个剂量干预组（丹参酮低剂量组丹参酮 IIA50μg/mL+TGF-β15ng/mL，丹参酮 IIA中剂量组丹参酮 IIA100μg/mL+TGF-β15ng/mL、丹参酮 IIA高剂量组丹参酮 IIA150μg/mL+TGF-β15ng/mL)。 1、TGF-β15ng/Ll干预 A549细胞生长24小时，设置空白对照组，采用细胞免疫化学法检测上皮标志蛋白 E-cad和间质标志蛋白α-SMA表达量的变化情况。 2、采用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测不同剂量 TanⅡA作用于 A549细胞后各组的吸光值（OD值），计算其增殖活性，绘制细胞增殖曲线。 3、采用倒置显微镜观察各组细胞的生长状态与形态变化。 4、电子显微镜下观察各组细胞超微结构发生的变化。 5、体外培养 A549细胞，用 TGF-β1刺激其发生上皮-间质转化，采用丹参酮 TanⅡA低、中、高3个剂量干预细胞生长12小时和24小时，提取细胞总蛋白，用 BCA法进行蛋白定量，采用蛋白免疫印迹技术（western blot）检测上皮-间质标志蛋白 E-cad、α-SMA、通道蛋白 Smad3、Smad7的表达量及其变化，以 GAPDH作为内参，用 BandScan分析条带的灰度值。 结果 1、细胞免疫化学结果表明：采用 TGF-β15ng/mL干预 A549细胞生长24小时后， TGF-β1诱导组和正常组相比较，上皮细胞的特异性标志蛋白E-cad表达下降而间质细胞标志物α-SMA表达增加，且差异具有统计学意义（P﹤0.01）。 2、MTT检测结果显示：与正常对照组相比较， TGF-β1诱导组细胞活力略高，但是差异并不具有统计学意义（P>0.01）；TanⅡA中药干预组细胞的增殖活力下降，与空白组和模型组相比较，差异有统计学意义（P﹤0.05）。 3、倒置显微镜观察显示：经过 TGF-β1刺激后， A549细胞由空白组的铺路石样贴壁生长呈现出间质细胞的特征，呈明显的拉长状态，由鹅卵石状转变为纺锤型或梭型，出现伪足样改变，藤索样生长，类似于成纤维细胞，且细胞之间间隙增大。通过观察丹参酮 IIA各剂量组发现，细胞的形态逐渐接近正常的 A549细胞，视野内细胞的数目按一定的剂量效应关系减少。 4、透射电子显微镜观察结果显示：空白对照组细胞在透射电镜下可见板层小体，表面许多绒毛状突起，核大、核仁明显，核内异染色质丰富，粗面内质网和线粒体多， TGF-β1作用24h后， A549细胞特有的嗜锇性板层小体变性、肿胀、出现空泡变并且数量减少，绒毛状突起也减少，粗面内质网增多，线粒体肿胀，中药干预组细胞出现核染色质呈固缩状。 5 Western blot结果显示：经过 TGF-β1诱导后，细胞内 E-cad、Smad7的表达量降低；α-SMA、Smad3的表达量上升，与正常组相比具有显著性差异（P﹤0.05），丹参酮 IIA干预后， E-cad、Smad7、α-SMA、Smad3和正常组相接近，各组间差异具有统计学意义（P﹤0.05）。 结论 1、TGF-β1能刺激人肺泡上皮细胞向间质细胞发生转变。 2、丹参酮 IIA作用后， A549细胞形态逐渐趋向于正常，并且这种抑制作用呈现出一定的剂量依赖性，随着用药浓度的增加会更明显。 3、TGF-β1刺激 A549后，间质标志蛋白分泌增加而上皮标志蛋白分泌减少，与丹参酮 IIA共同作用后间质标志蛋白α-SMA的表达量下降而 E-cad的表达量上升，并呈明显的剂量依赖性。 4、TanⅡA抑制 TGF-β1诱导的人肺泡上皮细胞 A549发生上皮间质转化的机制可能与通过调节通道 Smad蛋白 Smad3/7有关。