辣椒素立方液晶纳米粒制备及辣椒素抗成纤维细胞增殖的初步研究

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[目的]:  1.通过星点设计-效应面法优化法优化立方液晶纳米粒制备工艺,制备辣椒素立方液晶纳米粒,制备动物创伤模型,观察辣椒素及辣椒素立方液晶纳米粒对创伤修复及瘢痕增生抑制效果。  2.通过体外原代培养获得新生SD大鼠皮肤成纤维细胞,观察辣椒素对成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及可能的分子机制。  [方法]:  1.以植烷三醇为液晶材料、泊洛沙姆407(F127)为稳定剂,通过高速剪切和超声破碎制备立方液晶纳米粒,采用星点设计-效应面法探讨超声参数(超声时间、超声功率)对纳米粒样品液温度、粒径的影响。  2.构建SD大鼠背部皮肤创伤模型,观察辣椒素及辣椒素立方液晶纳米粒对创伤修复与瘢痕增生抑制效果。  3.通过体外原代培养获得新生SD大鼠皮肤成纤维细胞,采用MTT法检测不同浓度辣椒素(0.5,1,2,4,8μg/ml)作用24h后,皮肤成纤维细胞的存活率及IC50,用倒置显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot检测FoxO1、P-FoxO1、Akt、P-Akt蛋白表达改变。  [结果]:  1.超声功率对立方液晶纳米粒温度、粒径均有显著的影响,优化工艺条件为使用50.0%超声功率超声6.0 min。采用优化后的工艺进行验证,预测值与实测值较接近,表明效应面法优化的制备工艺预测性好。  2.动物实验证实,辣椒素刺激性强,延缓伤口愈合;辣椒素立方液晶纳米粒刺激性明显减低,动物创伤愈合时间明显缩短,没有明显的瘢痕,愈合效果较好。  3.采用MTT法检测及倒置显微镜观测发现,随着辣椒素浓度的增高,细胞存活率逐渐降低,且呈现浓度依赖性,IC50为3.55μg/ml;流式细胞仪细胞周期结果显示,辣椒素可将皮肤成纤维细胞阻滞在G1期;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法及Hoechst33258染色结果显示,辣椒素处理后,皮肤成纤维细胞的凋亡率增加;Westem blot结果显示,相比对照组,辣椒素作用能降低P-Akt及P-FoxO1的蛋白表达水平。  [结论]:  1.星点设计-效应面法可优化立方液晶纳米粒制备工艺,制备的辣椒素立方液晶纳米粒具有较好的促创伤修复效应。  2.辣椒素能抑制皮肤成纤维细胞的增殖、促进细胞凋亡,且呈现浓度依赖效应。Akt-FoxO1信号通路可能参与了辣椒素的抗增殖效应。
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