microRNA-124a在大鼠损伤脊髓中的表达及与钙蛋白酶1的相关分析

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【目的】:观察并分析大鼠急性脊髓损伤后microRNA-124a(miRNA-124a)和钙蛋白酶1(calpain1)基因表达变化及二者间的关系,为探寻脊髓损伤潜在的干预靶点提供实验依据。【方法】:采用改良Allen,s法建立大鼠急性脊髓损伤模型;将108只大鼠随机分为无脊髓损伤组(A组、对照组,18只)、脊髓损伤组(B组、实验组、SCI组,包括SCI后6h、12h、24h、3d、7d组,每组18只);各组分别于相应实相行BBB评分评价神经功能、HE染色观察组织形态学变化、实时荧光定量PCR及原位杂交检测miRNA-124a和calpain1基因表达。【结果】:1、BBB评分:各损伤组较对照组BBB评分明显降低,差异均有统计学意义。2、HE染色:正常脊髓组织神经元形态结构正常;损伤后6h脊髓组织出现广泛水肿;12-24h后发展为坏死组织,急性炎性细胞浸润播散到灰质;损伤后24h-7d,血管通透性增加,神经细胞广泛溶解、坏死,并有大量炎症细胞浸润。3、实时荧光定量PCR:各损伤组脊髓组织中miRNA-124a的表达均降低,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);脊髓损伤后calpain1表达逐渐增高,24h时达到高峰,随之下降,至3d时表达仍高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),7d时calpain1不表达或低表达,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。急性脊髓损伤后miRNA-124a、calpain1两种基因的表达呈显著负相关(r=-0.89)。4、原位杂交:miRNA-124a、calpain1mRNA主要表达于大鼠脊髓腹角运动神经元,二者的细胞内定位为胞浆染色。miRNA-124a主要表达于对照组及脊髓损伤后7d组,而calpain1mRNA主要表达于脊髓损伤后6h、12h、24h、3d组。【结论】:脊髓损伤后miRNA-124a基因表达显著降低,而calpain1的表达明显上调,二者呈显著负相关;calpain1基因表达可能受调于miRNA-124a。
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