白桦酯醇诱导Hela细胞凋亡及作用机制的体外研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:okyy1234
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目的:研究白桦酯醇(Betaulin,BE)在体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的机制。方法:以不同浓度的白桦酯醇作用于HeLa细胞,用MTT法观测白桦酯醇对HeLa细胞培养24h、48h和72h的细胞生长抑制情况;倒置相差显微镜下观察白桦酯醇作用后HeLa细胞的形态学变化;TUNEL法检测细胞凋亡;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术定量检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测白桦酯醇作用于细胞后caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]蛋白的表达。结果:不同浓度白桦酯醇能抑制HeLa细胞的增殖,且呈剂量依赖关系(P<0.01),其24h、48h、72h的IC50分别为32.82、25.29和15.22μg/ml;倒置相差显微镜下观察到白桦酯醇处理24h后,细胞体积缩小,核固缩,细胞的折光性减弱,且随着白桦酯醇浓度的增加上述形态变化增强,呈典型的凋亡形态学改变;TUNEL法及流式细胞术显示,经不同浓度白桦酯醇处理24h后,HeLa细胞发生凋亡,且随药物浓度的增加凋亡率明显增高,白桦酯醇为12.5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml浓度组的早期凋亡率分别为(2.21±0.36)%、(4.20±0.67)%(P<0.05)、(14.92±1.46)%、(27.23±2.59)%,晚期凋亡率分别为(3.46±0.42)%、(13.24±1.82)%、(28.73±2.44)%、(47.38±4.46)%(P<0.01);蛋白质印迹法检测示,随加药浓度的增加,HeLa细胞中caspase-3、PARP蛋白表达均不同程度上调趋势。结论:在一定的浓度范围内,白桦酯醇可在体外抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调caspase-3、PARP蛋白的表达有关。
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