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奶牛乳腺纤维化主要由奶牛乳腺炎引起，各种病因引起的奶牛乳腺炎均可导致奶牛乳腺不同程度的纤维化过程。纤维化的乳腺泌乳量降低，严重时发展为乳腺硬化导致奶牛淘汰。研究细胞因子在奶牛乳腺纤维化中的作用，对奶牛乳腺纤维化的防治具有重要意义。目前关于奶牛乳腺纤维化发生机制的研究报道很少，在奶牛乳腺纤维化过程中，除间质成纤维细胞（BMFB）能够产生细胞外基质（ECM）外，奶牛乳腺上皮细胞（BMEC）能否通过上皮-间质转化（EMT）形成肌纤维母细胞（MFB）并合成ECM仍不明确，与纤维化相关的一些细胞因子与BMEC的转分化及BMFB产生ECM的相互关系需要深入研究。本研究分别用不同浓度的TNF-α（1、5、10ng/mL）、IFN-γ (5、10、20ng/ml)及TNF-α/IFN-γ联合液（浓度比分别为1:1、1:2、1:5）作用于体外培养的BMEC和BMFB，于不同时刻（12h、24h、48h、72h）取细胞总RNA和总蛋白，分别用实时荧光定量RT-PCR和western-blot方法检测平滑肌肌动蛋白（α-SMA），结缔组织生长因子（CTGF）及胶原（ICOLIα1）mRNA及α-SMA蛋白表达水平。同时，根据细胞因子放免检测结果，用筛选出的含有五种细胞因子（TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、bFGF、PDGF）的奶牛乳汁分别作用体外培养BMEC和BMFB，于不同的时刻(12h、24h、48h、72h)，用实时荧光定量RT-PCR的方法检测含有五种细胞因子的奶牛乳汁对两种细胞α-SMA、CTGF和COLIα1mRNA相对表达量的影响。结果显示：外源性TNF-α对BMEC和BMFB α-SMA、CTGF和COLIα1三种基因mRNA表达基本起促进作用，对BMFB α-SMA的蛋白表达也起促进作用，但未检测到BMEC α-SMA蛋白的表达；外源性IFN-γ对BMEC和BMFB α-SMA、CTGF和COLIα1三种基因mRNA及α-SMA蛋白表达均呈抑制作用。不同比例的TNF-α/IFN-γ联合液均能明显抑制BMEC CTGF、α-SMA、COLIα1mRNA及α-SMA蛋白表达，且负时效、负量效关系明显；对BMFB CTGF、α-SMAmRNA及α-SMA蛋白表达也起明显抑制作用，但对COLIα1mRNA表达起促进作用。TNF-α和TGF-β高含量的乳汁作用BMEC和BMFB在各时刻（12h、24h、48h、72h）α-SMA、CTGF和COLIα1mRNA表达量均比低含量的乳汁作用高； IFN-γ高含量的乳汁对BMEC CTGF和COLIα1mRNA表达量的抑制作用较低含量的乳汁强，而对α-SMAmRNA表达量作用相反；对BMFB CTGF和COLIα1mRNA表达量的抑制作用，12h、24h含量高的乳汁较含量低的乳汁作用强，但48h、72h却相反，而对BMFB α-SMA的mRNA表达量的抑制作用，IFN-γ高含量的乳汁比低含量的乳汁强。bFGF高含量的乳汁作用BMEC和BMFB，CTGF和COLIα1mRNA表达量均比bFGF低含量的乳汁作用高，但对α-SMA mRNA表达的抑制作用却相反。PDGF-BB高含量的乳汁作用BMEC，CTGF和COLIα1mRNA表达量均比低含量的乳汁作用高，但对α-SMA mRNA表达的抑制作用却相反；PDGF-BB高含量的乳汁作用BMFB，α-SMA mRNA表达量均比低含量的乳汁作用高，而对CTGF和COLIα1mRNA表达的影响却相反。研究结果表明，两种外源性细胞因子及含有细胞因子的乳汁对奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞中纤维化指标的表达均产生一定的作用，为进一步探究乳腺纤维化的发生机制奠定了基础。