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【目的】青蒿琥酯(artesunate，ART)化学名为二氢青蒿素-1，2-α-琥珀酸单酯，分子量384，是青蒿素的衍生物之一。目前发现其对多种癌细胞株有明显杀伤作用，其中白血病及结肠癌细胞最为敏感，而对人体正常细胞作用轻微。其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡，阻滞其细胞周期和抗肿瘤血管生成有关，确切的机制尚不十分清楚。端粒酶(telomerase)是一种特殊的逆转录酶，端粒酶的活化可以防止DNA复制造成的端粒缩短，使端粒长度得以稳定，从而使细胞获得无限增殖能力成为永生细胞。而获得永生性是细胞恶变的关键步骤。端粒酶活性的增强与肿瘤的发生、发展密切相关。K562细胞为强端粒酶表达细胞，是端粒酶研究的较理想模型。本研究拟观察青蒿琥酯对人急性红白血病细胞株K562细胞的增殖、细胞周期及细胞凋亡作用，并探讨其与端粒酶活性的关系。
【方法】
(1)体外培养白血病细胞株K562细胞，取对数生长期的细胞用于实验研究。
(2)应用MTT法、细胞形态学法观察青蒿琥酯对体外培养的K562细胞的增殖抑制作用，找出最佳药物作用浓度及作用时间，并设不加青蒿琥酯组作为对照组。
(3)采用Annexin V-EGFP及PI染色在流式细胞仪上检测不同浓度的青蒿琥酯作用于体外培养K562细胞凋亡及细胞周期的变化。
(4)应用TRAP-PCR-ELIsA检测法检测不同浓度的青蒿琥酯对体外培养K562细胞端粒酶活性的变化。
【结果】
(1)在青蒿琥酯终浓度为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml作用K562细胞24h、48h及72h后，同一时间点上，随着浓度的增加，抑制率逐渐增加，实验组与对照组相比较，差异具有统计学意义(P<0.01)。随着作用时间的延长，各实验组之间相互比较，差异亦具有统计学意义(P<0.01)。24h、48h和72h的IC<,50>分别是32.74±0.51μg/ml、15.03±0.8μg/ml和8.70±0.6μg/ml。细胞形态学观察显示：在青蒿琥酯终浓度为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml作用K562细胞24h、48h及72h后，K562细胞的活细胞数随着青蒿琥酯浓度的增加及培养时间的延长，其活细胞数逐渐减少。
(2)流式细胞技术显示：在青蒿琥酯终浓度为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml作用于K562细胞24h及48h后，同一时间点上，随着浓度的增加，K562细胞阻滞于G<,2>-M期细胞百分比增加，伴G<,0>/G<,1>期细胞百分比明显下降，实验组与对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.01)。各实验组之间相互比较，差异亦具有统计学意义(P<0.01)。S期细胞百分比无明显变化，与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。
(3)Annexin V-EGFP在流式细胞仪上检测不同浓度的青蒿琥酯作用K562细胞24h、48h和72h，在同一时间点上，随着浓度的增加，凋亡细胞数目逐渐增多，各实验组与对照组比较，差异具有统计学意义(P<0.01)。在浓度为6.25μg/ml以上，随着作用时间的延长，凋亡率逐渐增加，实验组之间相互比较，差异亦具有统计学意义(P<0.01)。
(4)青蒿琥酯在终浓度为0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml作用于K562细胞24h、48h和72h后，随着浓度的增加，端粒酶活性逐渐下降，各实验组与对照组比较，差异具有统计学意义(P<0.01)。各实验组之间相互比较，差异亦具有统计学意义(P<0.01)。
【结论】
(1)青蒿琥酯抑制K562细胞增殖，呈剂量和时间依赖性。
(2)青蒿琥酯诱导K562细胞G<,2>-M期阻滞。
(3)青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡，呈剂量和时间依赖性。
(4)青蒿琥酯在诱导K562细胞G<,2>-M期阻滞及细胞凋亡过程中，伴端粒酶活性下降呈剂量和时间依赖性。
(5)青蒿琥酯诱导K562细胞G<,2>-M期阻滞及细胞凋亡的机制可能与下调端粒酶的活性有关。