牛心朴子内生真菌多样性及次生代谢产物研究

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目的:内生真菌是指存活于健康植物组织和器官内部,而不引起宿主植物明显病害症状的真菌,具有极其丰富的多样性。近年来的研究表明内生真菌可以产生结构新颖,活性独特,甚至是与宿主结构相同或相似的天然产物。本课题以沙生植物牛心朴子(Cynanchum komarovii Al.Iljinski)为实验材料,对采自宁夏古窑子、陕西榆林两个不同地区野生新鲜植株,进行内生真菌的分离、鉴定及代谢产物的抗真菌活性研究,并对活性菌株发酵物进行化学成分的分离、鉴定。  方法:采用组织分离法,在PDA培养基上分离植株内生真菌,并对分离得到的内生真菌进行形态及分子鉴定;对分离得到的菌株进行发酵培养,发酵物采用平板对峙法,以稻瘟霉模型对其代谢产物进行抗真菌、抗肿瘤活性筛选;在活性追踪指导下,采用现代色谱分离及鉴定技术,对活性菌株乙酸乙酯提取物进行化学成分的分离和结构解析。  结果:分离得到内生真菌103株,其中宁夏产地47株,由根中分离得到5株,茎中分离得到14株,叶中分离得到28株;采用形态学观察以及分子鉴定方法,对分离得到的内生真菌进行鉴定,归9个属,分别为Epicoccum、Schizophyllum、Ustilago、Fusarium、Cosmospora、Gibberella、Leptosphaerulina、Lewia、Alternaria;陕西产地56株,由根中分离得到16株,茎中分离得到18株,叶中分离得到13株,花中分离得到9株,采用形态学观察以及分子鉴定方法,对分离得到的内生真菌进行鉴定,归8个属,分别为Schizophyllum、Lanzia、Nectriaceae、Fusarium、Gibberella、Hypocrea、Paraphoma、Alternaria。  通过初步筛选,发现其中2株L4(Dothideomycetidae-Epicoccum)、S17(Pleosporales-Phaeosphaeriaceae-Paraphoma)表现出较强的抑菌活性。  从活性菌株L4发酵物中(8.3 g)分离得到43个单体化合物,确定了其中5个化合物的结构,分别为对羟基苯甲醛、尿嘧啶苷、L-焦谷氨酸、甲基焦谷氨酸、蔗糖。  结论:牛心朴子内生真菌具有丰富的多样性,活性较好且次生代谢产物丰富。
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