论文部分内容阅读
目的:观察缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响,并检测大鼠肾脏水通道蛋白-1、2、5(AQP1、AQP2、AQP5)m RNA和蛋白的表达变化,为缬沙坦治疗高血压的药效学机制提供新的理论依据,并为抗高血压药的研发提供可能的作用靶点。方法:自发性高血压大鼠(SHR)和Wistar Kyoto(WKY)大鼠分别12只,随机分为缬沙坦灌胃组(SHR-V组、WKY-V组)和生理盐水灌胃组(SHR-N组、WKY-N组),每组各6只。灌胃剂量:缬沙坦为每天10mg/kg体重,生理盐水为换算出的不含缬沙坦的相应体积。每周称量大鼠体重并以此调整一次药物剂量,用无创血压仪测量尾动脉收缩压一次,持续至第40周时腹主动脉采血并收集肾脏,用ELISA和化学发光法分别测定血浆精氨酸加压素(AVP)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,用苏木素-伊红(HE)染色,观察各组大鼠肾脏形态学变化,用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肾脏AQP1,2,5 m RNA和蛋白的表达变化,用免疫组织化学(IHC)法观测肾脏AQP1,2,5蛋白的定位和表达。结果:1.SHR血压值在第12周开始灌胃时明显高于WKY大鼠;在第16周时SHR-V组血压值比SHR-N组已有明显降低(P<0.05);第40周时,血压进一步降低,但仍明显高于WKY-N组和WKY-V组,而WKY-N组与WKY-V组之间无明显差异(P>0.05)。2.第40周血浆AngⅡ浓度:SHR-V组比SHR-N组、WKY-V比WKY-N组均明显升高(P<0.05);SHR-N组比WKY-N组、SHR-V组比WKY-V组均略有升高,但无统计学意义。血浆AVP浓度:SHR-V组比SHR-N组明显降低(P<0.05);WKY-V组比WKY-N组明显升高(P<0.05);而SHR-N组比WKY-N组、SHR-V组比WKY-V组均明显降低(P<0.05)。3.第40周肾脏HE染色显示,WKY-N组与WHY-V组肾小球毛细血管壁薄,基底膜未见明显增厚,肾小管腔刷状缘及肾小囊腔清晰可见。SHR-N组可见部分肾小球增大,肾小管管腔及毛细血管扩张,部分肾小球萎缩,囊腔内分叶状增多,毛细血管结构不清,系膜细胞及基质增生,肾小管间质增多,管腔变窄,SHR-V组中上述病变明显减轻。4.第40周肾脏RT-PCR结果显示,SHR-V组比SHR-N组AQP1,2,5 m RNA相对表达量均明显升高(P<0.05);WKY-V组比WKY-N组均无明显改变(P>0.05);SHR-N组比WKY-N组AQP1,5明显降低(P<0.05),而AQP2则明显升高(P<0.05);SHR-V组比WKY-V组AQP1,5无明显变化(P>0.05),而AQP2则明显升高(P<0.05)。5.第40周肾脏Western blot结果显示,SHR-V组比SHR-N组AQP1,2,5相对灰度值均明显升高(P<0.05);WKY-V组比WKY-N组AQP1,2,5均无明显改变(P>0.05);SHR-N组比WKY-N组AQP1,5明显降低(P<0.05),而AQP2则无明显改变(P>0.05);SHR-V组比WKY-V组AQP1,2,5均无明显改变(P>0.05)。6.第40周肾脏IHC结果显示,AQP1在皮质主要表达于近端小管,在髓质主要表达于髓袢降支细段,WKY-N组平均光密度值皮质明显高于髓质(P<0.05),WKY-V组以及SHR-V组皮质均明显低于髓质(P<0.05),SHR-N组则无明显差异(P>0.05);AQP2在皮质主要表达于连接小管和皮质集合管,在髓质主要表达于髓质集合管,WKY-N组、WKY-V组、SHR-N组以及SHR-V组皮质平均光密度值均明显低于髓质(P<0.05);AQP5在皮质主要表达于连接小管和皮质集合管,在髓质主要表达于髓质集合管,WKY-N组、WKY-V组、SHR-N组以及SHR-V组皮质平均光密度值均明显低于髓质(P<0.05)。结论:1.在自发性高血压后期,SHR肾脏内局部RAS更加活跃,AVP的体液调节作用相对增强,缬沙坦可以使SHR的体液调节效应进一步加强。2.血压的长期变化过程会引起大鼠肾脏AQP1在皮质与髓质间的重新分布,缬沙坦可以改变SHR AQP1皮质与髓质间的平均分布状态,使髓质表达增多。3.AQP2在大鼠肾脏的分布皮质低于髓质,缬沙坦能够显著提高SHR肾脏内AQP2 m RNA的表达,而蛋白表达升高相对缓慢。4.AQP5在大鼠肾内的分布皮质低于髓质,缬沙坦能显著提高SHR肾脏AQP5m RNA和蛋白的表达量。